Plasmid Mini Kit II（200）

质粒小量提取试剂盒II型,Plasmid Mini Kit II(200)详细介绍

上海远慕专业供应ELISA试剂盒，动物血清血浆，标准品对照品，质粒载体，质粒提取试剂盒，培养基，抗体，化学试剂，生化试剂，实验耗材，染色液，其他实验试剂等，代理多款进口（国产）品牌，价格实惠，质量有保证，洽谈！

名称：质粒小量提取试剂盒II型

英文名/型号：Plasmid Mini Kit II(200)

品牌：Omega

供应商：上海远慕

用途：从小于15ml培养过夜的菌液提取50-70ug高纯度质粒DNA

为了满足生物领域日益增加的要求，Omega新开发的基于磁珠的纯化方式，以其高结合力和高纯度的核酸产物等*性，已经在欧美市场得到广泛的接收。Omega的磁珠纯化方式，与目前大部分公司采用的硅磁颗粒不同，它采用的是纳米磁珠同正离子相藕连而成的微型颗粒，该颗粒的结合能力是传统硅磁的10-30倍，因而能大大提高核酸产量和纯度，目前该产品处于世界zui的水平。此外，为满足不同客户的需求，Omega还开发了一些成本较低的核酸纯化试剂盒，如盐析法纯化血液或组织基因组DNA纯化试剂盒，玻璃奶纯化试剂盒以及溶液型的RNA抽提试剂盒。

质粒小量提取试剂盒II型，Plasmid Mini Kit II(200)操作步骤：

1.样本处理收集已培养1216小时的菌液13ml12000rpm离心1分钟尽量吸除上清。          注：菌液较多时可以通过多次重复离心将菌体收集到1个离心管中。菌液收集量由菌浓而定收集菌体过多会反而降低裂解效果。 

2.悬浮向菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ用移液器反复吹打或涡旋振荡器*悬浮细菌细胞沉淀。 

3.裂解加入250ul溶液Ⅱ于细菌悬液中温和地上下颠倒6~8次，使菌体充分裂解，加1管混合1管，确保溶液充分、及时的混匀。充分裂解后的菌液会变得相对粘稠为防止DNA断裂避免剧烈混匀操作及裂解时间过长。 

4.中和加入350ul溶液Ⅲ, 立即温和上下颠倒6~8次充分混匀，加1管混合1管。此时会出现白色絮状沉淀静置2分钟12000rpm离心5分钟可适当延长至10min。
注：溶液Ⅲ加入后应立即混匀避免产生局部沉淀。若上清液中仍存在微小白色沉淀，可重复离心后取上清。 

5.吸附小心地将上清液转移至吸附柱中12000rpm离心30~60秒，弃收集管中废液，然后将吸附柱重新套入废液收集管中。若上清一次加不完，可重复操作转移时不可吸入沉淀，此步很重要。

6.漂洗向吸附柱中加入600ul漂洗液PW，使用前请检查是否已加入无水乙醇，12000rpm离心30~60秒。 

7.重复步骤6，弃收集管中废液。 

8.将吸附柱套于收集管中10000rpm离心2分钟。 
注：此步骤不可省略，目的是去除吸附柱中残余的漂洗液，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验，酶切，PCR等。 

9.洗脱将吸附柱置于一干净的1.5ml离心管中向吸附柱膜中央部位悬空滴加50~100ul溶解液TE或灭菌双蒸水，pH值在7.0-8.5，室温静置2~10分钟，12000rpm离心2分钟，即得提取质粒DNA置-20℃保存。 

Plasmid Mini Kit II(200)注意事项:

1.使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ 、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即拧紧盖子。

2.洗脱缓冲液体积不应少于 50ul，体积过小影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)， pH值低于7. 0会降低洗脱效率， DNA产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

3.如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 5-10ml 过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。

4.DNA浓度及纯度检测： 得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、 操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD 260 处有显著吸收峰，OD 260 值为 1 相当于大约 50ug/ml双链DNA、 40ug/ml单链DNA。OD 260 /OD 280 比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。

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