上海远慕讲述：人层连蛋白/板层素ELISA试剂盒的操作

  人层连蛋白/板层素（LN）ELISA试剂盒的操作步骤：

   1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。

    2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

   3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

   4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

   5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

  6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

技术原理：

    （1）抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

    （2）结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

    （3）酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

    （4）受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

    （5）此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

    （6）加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。