琼脂糖凝胶电泳实验

    琼脂糖凝胶电泳实验

   上海远慕生物主营产品有ELISA试剂盒、层析色谱填料、标准品、血清、染色液等，如有意向，可与我司销售。

    注：本公司产品仅供科研使用！

    一、试剂配制
    1.5×TBE缓冲液：450mmol/LTris-硼酸，10mmol/LEDTA，pH值8.0。使用时将上述储存液稀释10倍至0.5×TBE缓冲液，可同时作为电泳及制胶用的缓冲液。

    二、制胶
    1.根椐制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过锥瓶的50%容量）。琼脂糖粉末与0.5×TBEbuffer的比例（w：v）参考表1，常用琼脂糖浓度为0.7-1%。表1琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的*分辨范围琼脂糖浓度*线形DNA分辨范围

（bp）0.50%1000～300000.7%800～120001%500～100001.20%400～70001.50%200～30002%50～20002%～5%20～1000

    2.在锥瓶的瓶口上盖上保鲜膜或牛皮纸，并在膜或纸上扎些小孔，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥瓶，使琼脂糖充分均匀溶解。此操作重复数次，直至琼脂糖*溶解。

    3.使溶液冷却至50℃-60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭溶液（终浓度0.5μg/ml）或按照1μL/30mL的比例加入DNAgreen染料，并充分混匀。

    4.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3~5mm之间。制胶模如下图所示，小胶倒入25-30mL左右琼脂糖溶液，大胶则60-70mL左右，若需切胶回收，凝胶可适当加厚。

    5.在室温下使胶凝固，大约30分钟~1小时。

    三、上样

    1.取适量样品与6×上样缓冲液混匀（如：1μl样品与5μl6×上样缓冲液），用微量移液枪小心加入样品槽中。

    2.上样量根据样品浓度可适当调整，若DNA含量偏低，则可依上述比例增加上样量，但总体积不可超过样品槽容量（一般小孔40μl为上限，大孔200μl为上限，具体和制胶膜规格相关）。

    3.每加完一个样品要更换枪头，以防止互相污染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。

    四、电泳
    1.加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在110V，电流在40mA以上。
    2.当条带移动到距凝胶前沿约2cm时（约40min），停止电泳。
    3.紫外下拍照并观察