血浆游离血红蛋白测定方法

　　分析：血浆游离血红蛋白测定方法
　　
　　ELISA试剂盒实验原理
　　
　　血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。
　　
　　实验方法
　　
　　材料：
　　
　　1．2g/L邻甲联苯胺溶液
　　
　　2．1%H2O2
　　
　　3．10%醋酸溶液
　　
　　4．分光光度计
　　
　　方法：
　　
　　1.抽取静脉血2-3ml，枸橼酸钠抗凝，离心分离血浆。
　　
　　2．按下表进行操作，用分光光度计，波长为530nm，以空白管调零，测定测定管的吸光度。
　　

试剂 （ml）	测定管	空白管
2 g/L邻甲联苯胺溶液	0.5	0.5
患者血浆	0.02	/
1% H2O2	0.5	0.5
混匀后室温放置10min
10%醋酸溶液	5.0	5.0
室温放置10min

　　
　　3.计算公式
　　
　　血浆游离Hb（mg/L）=测定管吸光度/标准管吸光度×100
　　
　　实验结果计算
　　
　　参考范围：0-40mg/L
　　
　　注意事项
　　
　　1.一切容器避免血红蛋白污染；
　　
　　2.采血要顺利，器皿要干燥，检测血浆要新鲜，及时分离，防止人为溶血；
　　
　　3.邻联苯胺溶液具致癌性，检测时要小心，废液要妥善处理，以免污染；
　　
　　4.双氧水要新鲜配置，浓度要准确