ELISA检测试剂盒的准确操作步骤

ELISA检测试剂盒的准确操作步骤

面对市场上种类越来越多的ELISA检测试剂盒，人elisa试剂盒、小鼠elisa试剂盒、猪elisa试剂盒、羊elisa试剂盒等，再选择的时候我们就有些眼花缭乱了。虽然每个ELISA试剂盒价格都不贵，但是如果使用不恰当的话，造成检测结果出差错还是不好的。所以在使用ELISA检测试剂盒做检测的时候，步骤的准确性真的是相当重要的。以下先介绍一种简单的—间接法：

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

6.zui后一遍用DDW洗涤。

7.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

8.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

9.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

如果按照以上的步骤用于ELISA检测试剂盒检测的话，那么不论购买的国产ELISA试剂盒还是进口ELISA试剂盒的话，那么检测结果的准确率都不低的。