蓝色-琼脂糖凝胶 CL-6B使用说明

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蓝色-琼脂糖凝胶 CL-6B参数说明

中文名：蓝色-琼脂糖凝胶 CL-6B

英文名： Blue Sepharose CL-6B

供应商：上海远慕

规格：25ml、100ml

工作PH值：3-12

操作温度：4-40℃

结构成分：6%交联琼脂糖

保存条件：4℃

性状：白色微球，凝胶状，保存在20%酒精溶液中

应用：蛋白、多肽、多糖的分离、分子量测定等

蓝色-琼脂糖凝胶 CL-6B使用说明

蓝色-琼脂糖凝胶 CL-6B操作步骤

1、装柱：

a、让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

b、根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

c、将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

d、用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

e、打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2、平衡：

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。

3、上样：

a、样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。

b、一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

c、介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用DEAE介质时，推荐的pH值是大于目标产品等电点1个单位。

4、洗脱：

DEAE介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

5、再生:

一般用高盐浓度的缓冲液(含1~2mol/L NaCl)洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

6、在位清洗:

a、对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

b、对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

c、对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡;清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7、注意：

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入;在使用过程中，不能使用强酸，如使用酸洗，应使用浓度低于0.1 M的冰醋酸。

8、去热源：

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

a、2倍柱体积的70%乙醇;

b、2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5;

c、1倍柱体积4M尿素;

d、3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl;

e、以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

9、消毒:

用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

10、灭菌:

置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。

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