葡聚糖凝胶G-100使用方法

葡聚糖凝胶G-100使用方法，参数说明，分离技巧等咨讯由上海远慕生物详细介绍，本司是家专业从事实验试剂的商家，现货供应不同系列的糖凝胶系列产品，包含有：葡聚糖凝胶G-200，琼脂糖凝胶2B，琼脂糖凝胶6B，葡聚糖凝胶G-50，更多系列请！

葡聚糖凝胶G-100参数说明：

中文名：葡聚糖凝胶G-100

中文别名：交联葡聚糖凝胶 G-100，交联右旋糖酐凝胶 G-100

英文名：Sephadex G-100

供应商：上海远慕

干颗粒直径： 40～120 μm

分子量分级范围：A.肽及球形蛋白质：4000～150000；B. 葡聚糖(线性分子)：1000～100000

床体积毫升/克干分子筛：12～15ml/g

PH：2～13

应用：利用分子筛作用；进行多肽分离，脱盐，清洗生物提取液，分子量测定

性状：白色微球，多孔

凝胶类型：凝胶过滤填料，亲水型凝胶

结构成分：交联右旋糖酐

保存：4-25℃

葡聚糖凝胶G-100使用方法

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1、葡聚糖凝胶预处理：在室温下，将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀，凝胶体积不再变化。

注：在溶胀前，加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降，沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多，需要重复多次漂洗将其除去，防止层析时阻塞凝胶柱，影响流速。

2、装柱：将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；装柱要均匀，可在凝胶耐受的操作压下装柱，装好的凝胶柱可以检测柱效，检测过滤柱装填是否合格。

凝胶层析分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度：分级分离时，一般需要 100cm 左右长的层析柱，柱高与直径之比为 20:1-100:1，柱高过高时，凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压，应当尽可能避免；分组分离(例如脱盐)时用短柱，柱高控制在40-50cm 以下，柱高与直径的比约为 5:1-10:1。

3、平衡：上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

4、上样：分级分离时上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整，脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积；样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去，样品的粘度不能过高，否则影响分离效果。

5、洗脱方法:可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化。

6、在位清洗(CIP)：凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白；方法是以40cm/h用1M氢氧hua钠反向清洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

7、保存：凝胶柱暂时不用，可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，可加入0.02%叠氮hua钠防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生长。

葡聚糖凝胶G-100分离技巧:

1、分离时流速不可太快，切切不可心急，所谓欲速则不达；接馏分时可开全速，节省时间。

2、柱子尽可能长，葡聚糖凝胶柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱.

3、馏分一定要接的细，可1/10，或1/20个保留体积接成一馏分。

4、洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

5、鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用SephadexLH20分鞣质.

6、葡聚糖凝胶对黄酮类成分的分离效果，方法很成型，有大量文献参考。

7、填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用；暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，zui后泡在醇中贮于磨口瓶中备用；如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙迷洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80°C干燥后保存。

葡聚糖凝胶G-100性状说明：

色珠粒或粉末，属亲水性凝胶！性稳定，不溶于水，弱酸和碱溶液，遇强酸糖甘键分解用于凝胶过滤，在强酸中凝胶骨架的糖甘键被水解。

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