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华瑞科研网-ELISA试剂盒
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阅读:165发布时间:2014-11-04
华瑞科研网-ELISA试剂盒
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人阿米巴原虫抗原(Amebiasis Ag)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人阿米巴原虫抗原(Amebiasis Ag)表达。用纯化的抗
体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中阿米巴原虫抗原(Amebiasis Ag)相结合,经洗涤
除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合
物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作
用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF 值相
比较,从而判定标本中人阿米巴原虫抗原(Amebiasis Ag)的存在与否
人阿米巴原虫抗原(Amebiasis Ag)Elisa试剂盒操作步骤
1.
编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.
加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不
触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.
温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.
配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7.
温育:操作同 3。
8.
洗涤:操作同 5。
9.
显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
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