增强膜蛋白和疏水蛋白的可溶性

新颖的去污剂混合物

即时可用的ZOOM? 2D Protein Solubilizers是1.1X溶液,由溶解在去离子、0.2微米过滤的7.7M尿素(urea)和2.2M硫脲(thiourea)中的*的去污剂混合物组成。

通过这些混合物你将:

节省时间以及消除制备错误--无需称量混合固体试剂和离液剂去离子。

获得可重复结果-ZOOM? 2D Protein Solubilizers经过优化,提供一致的质量,zui小化人为影响。

保持蛋白的溶解性--提取蛋白能够直接应用到IPG strips,并且在饱和离液剂浓度和整个*向蛋白分离过程中保持溶解。

比传统的UTC更好地提取蛋白

正如通过2DE和SimplyBlue? SafeStain 染色的评估,ZOOM? 2D Protein Solubilizers比目前广泛使用的7M尿素、2M硫尿以及4%CHAPS(UTC)溶液从组织中溶解更多的蛋白(图1 )。来自通过使用两种ZOOM? 2D Solubilizer 提取样品的数据揭示新的和更加密集的斑点,而且溶解良好,线条更少。事实上,只有ZOOM? 2D Solubilizer提取物能够鉴定膜离子通道蛋白、ompF(黑箭头)、proin和ompA(红箭头)。

图1 比传统的UTC更好地提取蛋白

使用下列混合物之一制备5%(v/v)大肠杆菌溶解物:A:ZOOM? 2D Solubilizer 1 B:ZOOM? 2D Solubilizer2℃ 尿素-硫脲- CHAPS.提取物通过ZOOM? IPGRunner? System在pH 4-7 ZOOM? strip上进行IEF。第二向分析在NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels上进行,使用SimplyBlue? Safestain 染色。

增加溶解性,提高分辨率

溶解、提取、还原和烷基化应用的方法学,对于在组分分离和等电聚焦后2D胶上蛋白的分辨率非常关键。ZOOM? 2D Solubilizers通过去除干扰物质和增加从大肠杆菌溶解物中蛋白的提取而改进这些制备步骤(图2)。注意与UTG(57 斑点)比较,使用ZOOM? 2D Solubilizers1(94 斑点)和2(83 斑点)可以形成更多数量的斑点。更高的分辨率增强了分析和鉴定更多蛋白的能力。

图2 在组分分离大肠杆菌溶解物后,接着溶解在ZOOM? 2D 增溶缓冲液,增加了蛋白的数目

使用SDS提取大肠杆菌溶解物,还原和烷基化,丙酮沉淀,再次悬浮在A:UTG;B: ZOOM? 2D Solubilizer 1;或者ZOOM? 2D Solubilizer 2使用ZOOM? IPGRunner? System和ZOOM? Strip pH 9-12进行分离,接着在NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels进行第二向分离,zui后使用SimplyBlue? Safestain 染色。