士锋豆粕中尿素酶活性的测定

一、实验目的

掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。

二、实验原理

将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。

三、实验设备

1、样品筛：孔径200μm；

2、酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；

3、恒温水浴：可控温30±0.5℃；

4、试管：直径18mm，长1 50mm，有磨口塞子；

5、精密计时器；

6、粉碎机：粉碎时应不生强热（如球磨机

7、分析天平．感量0.1mg；

8、移液管；10mL。

四、实验内容

1、称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中，（如活性很高的样品，可只称0.05g试样），移入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30±0.5℃恒温水浴中，准确计时保持30min。即刻移人10m1盐酸溶液，迅速冷却到20℃。

2、将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定到pH4.70 。

3、另取试管作空白试验，移人10ml尿素缓冲液，10ml盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动，将试管置于30±0.5℃的恒温水浴，同样准确保持20min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.70。

4、以每分钟每克大豆制品释放氨的mg量来表示尿素酶的活性（UA），可按下式计算：

若试样经粉碎前的预干燥处理时，则其计算如下：

由一个分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之间的相差，应不超过平均值的10％，以其算术平均值报告结果。