核酸及核蛋白染色方法

一、Feulgen氏染色法： 该方法是显示DNA的一种常用方法。其基本原理是在酸水解下，去DNA中的嘌呤，使脱氧核酸的醛基暴露出来，然后再与Schiff氏试剂反应，生成紫红色产物，用于显微分光光度计和流式细胞测量计对细胞进行静态DNA测量和流式细胞测量。

操作方式： (1)切片常规脱蜡至水。(2)蒸馏水洗，1NHCI水溶稍洗。(3)浸入1NHCI水溶液60℃，8-10分钟。(4)取出后，1NHCI水溶液稍洗，蒸馏水洗数次。 (5)入Schiff氏液中室温下，暗环境30-90分钟。 (6)流水冲洗数分钟。 (7)常规脱水、封片。

结果：DNA呈紫红色。

注意事项： 1、1NHCL、Schiff液的配制方法见前。 2、该染色的优劣很关键。在于组织的固定。用甲醇85ml，福尔马林10ml，冰醋酸5ml配制的固定液效果很好。此外1NHCL液中酸化时间需严格控制。 3、5%亮绿淡复染，使胞浆及其它组织呈绿色。

二、核仁组成区蛋白显示法(PLOTON改良法) 核仁组成区(Nucleolar Organier regions,NORS)是转录核糖体RNA(rRNA)的染色体片断并与嗜银酸性非组蛋白有关。核糖体RNA基因直接控制着核糖体和蛋白质的合成，因此，计数细胞内的AgNORS的数量可反映细胞增殖的情况。经典的方法是经Plotor改进的银染法。

操作方法： (1)切片脱蜡入水。 (2)蒸馏水洗。 (3)去离子水洗。 (4)切片至ploton氏银液中室温下，暗环境60-90分钟。 (5)去离子水洗。 (6)蒸馏水洗。 (7)常规脱水封片。

结果：AgNORS位于细胞核内呈黑色的颗粒状。 试剂的配制： 1、1%甲酸、2%明胶溶液(甲液) 甲酸 1ml 明胶 2g 去离子水 100ml 2、50%硝酸银(乙液) 硝酸银 50g 去离子水 100ml 3、ploton氏银溶液 将甲液与乙液按1:2的比例于临用前混为ploton氏银溶液。

注意事项： 1、所用器皿需经酸缸清洗。 2、甲液配制时，应先按1%的浓度配制好甲酸液，再以此作为溶液溶解明胶。 3、有人用双蒸水替代去离子水也可达到上述效果。 4、银染后，用0.1%氯化金调色1-3秒，可使背景变清，效果更佳。