士锋生物淀粉与纤维素的测定

一、淀粉含量的测定(旋光法)
(一)实验目的
1.熟习旋光仪的使用方法。
2.了解旋光仪测定淀粉的原理并掌握其具体方法。
(二)实验原理
淀粉(starch)是植物的主要能量贮藏物质，主要存在于种子、块根和块茎中。淀粉不仅是重要的营养物质，并且在工业上的应用也很广泛。
将磨细的含淀粉样品与酸性氯化钙溶液共煮，可使样品中淀粉轻度水解，同时由于钙离子与淀粉分子上的羟基络合，使淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α)，旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。
应注意的是，酸性氯化钙溶液必须保持pH 值2.30，密度1.30，加时间的长短也要控制在一定范围，以保证各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］恒定不变(20℃)。样品中其他旋光性物质(如糖分)必须预先除去。
(三)仪器、原料和试剂
仪器
植物样品粉碎机、离心机、分析天平； 粗天平、旋光仪及附件、三角瓶、分样筛(100目)、布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵、离心管、小电炉。
原料
面粉或其他风干样品
试剂
1. 醋酸—氯化钙溶液：
500g 氯化钙溶于600mL 蒸馏水中，过滤至澄清，用比重计在20℃条件下调节比重1.3左右，再滴加冰乙酸调pH 为2.3。
2. 30％ZnSO4溶液
3. 15％K4Fe(CN)溶液
(四)操作步骤
1.样品准备
(1)称样脱脂：将样品风干、研磨，通过100目筛，称取约2.5g 样品细粉(要求含淀粉约2g)，置于离心管内，加乙数mL 到离心管内，用细玻棒充分搅拌，离心，倾出上清液，再加入乙如此操作数次，以去除样品的大部分油脂、色素等成分(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难)。
收集上清液以备回收乙。大多数谷物样品含脂肪较少，可免去这个脱脂手续。
(2)抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10mL 到离心管内，充分搅拌，然后离心，倾去上清液，得到沉淀物。
(3)脱糖：加80％乙醇10mL 到离心管中，充分搅拌以洗涤沉淀物(每次都用同一玻棒)，离心，倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。
2. 溶提淀粉
(1)加醋酸－氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约10mL 加到装有脱脂样品的离心管中，搅拌后全部倾入250mL 三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50mL 分数次洗涤离心管，洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。
(2)煮沸溶解：先用蜡笔标记液面高度，直接置于加有石棉网的小电炉上，在5min 内快速煮沸，保持沸腾15～17min，立即取下三角瓶，置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌并调节温度，防止烧焦或泡沫涌出瓶外，必要时加水保持液面高度。
3.沉淀杂质和定容
(1)加沉淀剂：将三角瓶内的水解液转入100mL 容量瓶，用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶，并入容量内，加30％ZnSO41mL 混合后，再加15％K4Fe(CN)1mL，用水稀释至接近刻度时，加95％乙醇数滴以破坏泡沫，然后稀释到刻度，混合、静置，以使蛋白充分沉淀。
(2)过滤：布氏漏斗(加一层滤纸)抽气过滤。先倒上清溶液约10mL 于漏斗滤纸上使*湿润，待溶液流干后，弃去滤液，再倒溶液进行过滤，用干燥的容器接受此滤液，收集约50mL，供测定之用。
4.测定旋光度
以空白液(乙酸—氯化钙溶液：蒸馏水=6：4)调旋光仪零点，再将旋光测定管装满滤液，小心地按照旋光仪使用说明，进行旋光度的测定。
(五)计算
淀粉与纤维素的测定
式中：
α—用钠光时观测到的旋光度；
203—20℃时淀粉的比旋度；
L—旋光管长度(dm)；
W—样品重量(g)；
H—样品水分含量。
也可以不用上列公式计算，改用工作曲线来求得淀粉含量，这样准确度高些。