士锋生物植物组织中淀粉含量的测定

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。
【仪器与用具】
电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。
【试剂】
（1）浓硫酸（比重1.84）；
（2）9.2mol/L HClO4；
（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；
（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。
【方法】
1．标准曲线制作
取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。
以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。
表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量
管 号
0
1～2
3～4
5～6
7～8
9～10
淀粉标准液(ml)
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
蒸 馏 水（ml）
2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
0
淀粉含量（mg）
0
40
80
120
160
200
2．样品提取
将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。
3．测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。
按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。
淀粉含量（%）=
式中 C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）；
V－提取液总量（ml）；
a－显色时取液量（ml）；
W－样品重（g）。
注：淀粉水解*度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解*度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不*，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。