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Anti-Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118)抗体,磷酸化多聚合苷酸激酶3磷

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更新时间:2018-01-20 08:20:23浏览次数:133次

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产品简介

Anti-Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118)抗体,磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗体现货供应,产品类型:一抗,产品应用:WB=1:100-500 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 ICC=1:100-500 ,研究领域:免疫学 神经生物学 干细胞 转

详细介绍

Anti-Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118)抗体,磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗体促销中,瑞齐生物抗体应用于WB、IHC、IF、ELISA等实验中,品质保证,提供完善的售前、售中、售后服务,咨询或在线客服,我们将竭诚为您服务。在RICKY,我们坚持对产品质量作不断的评估、创新和改善以确保您对我们产品的高度信任!
【产品名称】:Anti-Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118)抗体,磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗体

【规        格】:0.1ml/0.2ml
【浓        度】:1mg/1ml
【抗体来源】:Mouse,Rabbit or Goat
【克隆类型】:polyclonal or monoclonal
【产品类型】:一抗
【性        状】:Lyophilized or Liquid
【亚        型】:IgG
【纯化方法】:affinity purified by Protein A
【储 存 液】:0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【产品应用】:not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
【保存条件】:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Anti-Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118)抗体,磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗体应用于WB实验时的操作方法:蛋白提样品制备
1、 将培养液吸入至15 ml离心管中,于2500 rpm离心5 min。
2、 弃上清,加入5 ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤,然后2500 rpm离心5 min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。
3、 用枪吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。
4、将裂解液4℃、12000 rpm离心5 min,取上清分装于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法测蛋白浓度
SDS-PAGE电泳
1、 玻璃板对齐后放入夹中卡紧,然后垂直卡在架子上准备灌胶。
2、按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些,胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下,这样胶中才不会有气泡。加水液封时要慢,否则胶会被冲变型。)
3、 当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。再等3 min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4、 按方法配4%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶后将梳子插入孔槽。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。待到浓缩胶凝固后,两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5、 用水冲洗浓缩胶,将其放入电泳槽中。
6、 测完蛋白含量后,计算含20-50 μg蛋白(根据自己的实验需要进行选择,没有固定的量)的溶液体积即为上样量。取出上样样品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。上样前要将样品于沸水中煮5-10 min使蛋白变性。
7、 加入足够的电泳缓冲液后开始准备上样。(电泳液至少要漫过内测的小玻璃板。)用微量进样器贴壁吸取样品,将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品(包括一孔做可视的蛋白marker)。(加样太快可使样品冲出加样孔,若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时,进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤数次,以免交叉污染)
8、电泳:浓缩胶时用80-100 V跑,到分离胶以后用150-200 V跑,总时间2 h左右,电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳,进行转膜。
转膜
1、 转一张膜需准备6张7.0~8.3 cm的滤纸和1张7.3~8.6 cm的NC膜。切滤纸和膜时一定要戴手套,因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫,用玻棒赶走气泡。在垫子上垫三层滤纸。
3、将玻璃板轻轻撬开后剥胶,除去小玻璃板后,将浓缩胶轻轻刮去。小心剥下分离胶盖于滤纸上,用手调整使其与滤纸对齐,轻轻用玻棒擀去气泡。将膜盖于胶上,要盖满整个胶(膜盖下后不可再移动)并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除去气泡。zui后盖另一个海绵垫,合起夹子。整个操作在转移液中进行,要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触,接触后会发生短路。
4、将夹子放入转移槽槽中,使夹的黑面对槽的黑面,夹的白面对槽的红面。电转移时会产热,在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2 h或40 V转移3 h。
免疫反应
1、将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1 h。
2、将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5 ml离心管中);将膜涂满一抗溶液后置于湿盒中,4℃孵育过夜,用TBST在室温下脱色摇床上洗两次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min。
3、同上方法准备二抗稀释液并与膜接触,室温下孵育1~2 h后,用TBST在室温下脱色摇床上洗两次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min,进行化学发光反应。
化学发光,显影,定影
将A和B两种试剂在保鲜膜上等体积混合;1 min后,将膜蛋白面朝下与此混合液充分接触;1 min后,将膜移至另一保鲜膜上,去尽残液,包好,放入X-光片夹中,曝光相应时间。冲洗胶片。
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