细胞膜蛋白提取ELISA试剂盒产品简介：
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
需自备PMSF 。PMSF 一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3 分钟内加入，以免PMSF 在水溶液中很快失效。
使用本试剂盒抽提到的细胞 膜 蛋 白可 直 接 用BCA 法 蛋白浓度测定试剂盒
抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞膜蛋白提供了一种比较简单、方便地 从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、 内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。
本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细 胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。
约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，
Western、酶活性测定等后续实验。
膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影 响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。
本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。
使用说明：
1. 准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在 使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。
2. 准备细胞或组织样品：
a. 对于细胞
(1) 收集细胞
对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含*的细胞消化 液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避
免用*消化细胞，以免*降解需抽提的目的膜蛋白。
对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
(2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀 细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽zui大努力吸尽残 留液体。
(3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞， 冰浴放置10-15分钟。
b. 对于组织： 请来电向我公司ELISA试剂盒销售人员咨询。
