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公司动态

ELISA试剂盒鉴定半滑舌鳎免疫组织miRNA谱

阅读:487发布时间:2014-3-28

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国重要的商业养殖鱼类之一。当前,C. semilaevisis的培养受到了严重的细菌和病原体威胁。弧菌病是zui常见的鱼类细菌感染,能引起鱼类包括C. semilaevisis的严重病害,而鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是该疾病的主要诱因。microRNA(miRNA)作为一类重要的非编码RNA,在多种生物过程包括免疫应答中发挥重要的调控作用。然而,目前尚没有关于miRNA在C. semilaevisis中参与病菌免疫应答的研究报道。为此,研究员利用ELISA试剂盒测序技术对C. semilaevisis在病菌侵染下的miRNA谱进行了全面分析。

研究人员首先从V. anguillarum侵染前后的C. semilaevisis的免疫组织(肝脏,头肾,脾,肠)中构建了3个小RNA文库,一个文库来自V. anguillarum未侵染的对照组(简称CG)。研究人员分别从上述3个文库中获取了11216875条,12313404条,和11398695条Clean Reads。生物信息学分析共鉴定出452个miRNAs,包括24个新的miRNAs。接着,研究人员对不同文库间差异表达的miRNAs进行了分析。在NOSG-CG比较中,有175个miRNAs(38.72%)存在显著差异表达。在HOSG-CG比较中,有215个miRNAs(47.57%)发生显著差异表达。相比于CG,进行HOSG-NOSG比较时,发现有122个miRNAs(26.99%)发生显著差异表达。采用ELISA试剂盒实时定量PCR对选取的10个miRNAs进行了验证,获得了与测序一致的结果。进一步对差异表达miRNAs的靶基因进行GO和KEGG通路分析,结果表明存在一组高丰度表达且在不同条件下显著差异表达的miRNAs可能参与了免疫系统的发育和免疫应答。


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