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上海纪宁实业有限公司
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阅读:503发布时间:2015-7-8
探索转染hVEGF165基因、人基质细胞衍生因子1α基因的大鼠成肌细胞在体外mRNA和蛋白表达,为进一步检测这两种基因对血管生成的协同效应奠定基础。方法取新生1日龄雄性SD大鼠,采用*消化法体外分离培养、纯化成肌细胞,并采用结蛋白免疫细胞化学染色鉴定。将质粒增强型绿色荧光蛋白-hVEGF165和EGFP-hSDF-1α转染第3代成肌细胞(转染组),以未转染质粒的细胞作为对照组。体外培养后各时间点行RT-PCR、Western blot、ELISA法检测两种质粒mRNA及蛋白的表达。
结果培养的细胞经鉴定确定为成肌细胞。荧光显微镜观察示成功转染hSDF-1α和hVEGF165进入成肌细胞,可见绿色荧光表达。转染组转染后各时间点与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。
结论转染hSDF-1α和hVEGF165进入大鼠成肌细胞后在体外均有表达,为下一步研究体内是否表达提供了实验依据。
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