大鼠25-D3ELISA酶联免疫分析说明书
本试剂盒仅供研究使用。
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中 25-D3D3含
量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 25-D3
化的大鼠 25-
D3(25(OH)D3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微
孔中依次加入 25-
D3(25(OH)D3)，再与 HRP标记的 25-
D3(25(OH)D3)
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在
HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的
D3(25(OH)D3)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），
通过标准曲线计算样品中大鼠 25-
大鼠25-D3ELISA酶联免疫分析说明书D3(25(OH)D3)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过
（HRP）活性。
温育：用封板膜封板后
37℃温育30分钟。
30倍稀释后备用
配液：将 30倍浓
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静
重复 5次，拍干。
孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
大鼠25-D3ELISA酶联免疫分析说明书注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有
析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD值
大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
