小鼠肽聚糖识别蛋白2elisa
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以上是elisa操作步骤,那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项:1.正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。2.在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%.可用水和电子天平进行确定.但有专业人员进行矫正.2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支.吸取不同的液体后,要更换枪头.即使是吸取标准品时.3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定.4、实验时,要使底物避光保存.5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确.6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差.7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去.8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体.也可以用酶标仪的晃动功能.9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发.10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*.没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干.11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液.加入1/1000的叠氮钠后可*保存.12、底物是光敏感的,要在临用前现配.13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上.14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触.15、待检样品要澄清,否则会影响结果.16、温浴时间应遵守试剂盒规定.17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性.18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证.
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