NB 基础培养基特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新NB 基础培养基中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
NB 基础培养基细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
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hz1036 乳糖胆盐发酵培养基 250g 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)
Lactose Bile Broth
hz1037 乳糖发酵培养基 250g 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)
Lactose Broth
hz1038 乳糖胆盐培养基 250g 用于化妆品中粪大肠杆菌的检验(GB标准)
Lactose Bile Medium
hz1039 乳糖蛋白胨培养基 250g 用于饮用水,水源水中总大肠菌群的测定
Lactose Peptone Broth
hz1041 伊红美蓝琼脂 (EMB) 250g 弱选择性培养基,用于分离肠道致病菌,特别是大肠杆菌
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hz1042 亮绿琼脂 250g 用于饮用水,水源水中沙门氏菌选择性增菌
Brilliant Green Lactose Broth
hz1043 亮绿乳糖培养基 250g 用于饮用天然矿泉水中大肠杆菌的检验(GB标准)
Brilliant Green Lactose Medium
hz1044 品红亚*琼脂(远滕氏琼脂) 250g 用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和确证
hz1045 Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar
hz1045 去氧胆酸盐琼脂 250g 用于大肠杆菌固体平板测定,肠道菌选择性分离
Desoybcholate Lactose Agar
hz1046 结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) 250g 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准)
Violet Red Bile Agar
hz1047 结晶紫中性红胆盐MUG琼脂(VRBA-MUG) 250g 用于大肠菌群和大肠杆菌的固体平板检测(BAM)
Violet Red Bile Agar with MUG
hz1048 MR-VP培养基 250g 用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准)
Methyl Red Voges Proskauer Broth
hz1049 肠道菌计数琼脂 (VRBDA) 250g 用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别
Violet Red Bile Dextrose Agar
hz1050 肠道菌增菌肉汤(EE) 250g 用于肠道菌的增菌培养(GB标准)
Enterobacteria Enrichment Broth
hz1051 西蒙氏枸橼酸盐琼脂 250g 用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准)
Simmons Citrate Agar
hz1052 麦康凯琼脂 250g 用于革兰氏阴性肠道杆菌的分离
MacConkey Agar


















