GC 琼脂基础特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新GC 琼脂基础中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
GC 琼脂基础细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
GC 琼脂基础相关产品如下:hz1696 表达SV40T和EBNA1的人胚肾细胞,293ET细胞
hz1697 表达HBV病毒的人肝细胞,HepG2.2.15细胞
hz1700 蝙蝠肺细胞,Tb 1 Lu细胞
hz1701 鼻咽癌细胞系 SUNE-1亚株-5-8F细胞
hz1702 鼻咽癌细胞,CNE细胞
hz1706 膀胱移行细胞癌细胞,T24细胞
hz1707 膀胱癌细胞,5637细胞
hz1710 白血病细胞,RBL-2H3细胞
hz1711 白血病细胞,L1210细胞
hz1712 白血病细胞,KG-1细胞
hz1726 VERO衍生株 SVP细胞
hz1727 U-2 OS(骨肉瘤细胞)U-2 OS细胞
hz1728 T细胞,CTLL-2细胞
hz1729 T淋巴细胞白血病细胞,HuT78细胞
hz1730 TNFa转染耐VP16绒癌细胞,JEG-3-VP16-TNFa细胞
hz1731 T 淋巴细胞白血病细胞) Jurkat,Clone E6-1细胞
hz1732 SV40转染人成骨细胞,hFOB1.19细胞
hz1733 SV40转化的非洲绿猴肾细胞,COS-7细胞
hz1734 SV40永生化的人胚肾上皮细胞,293T细胞
hz1735 SV40T转化的人胚肾细胞(亚系) 293T/17细胞
hz1736 SV40 转染成骨细胞,hFOB 1.19细胞
hz1737 SV40 转化的非洲绿猴肾细胞, COS-1细胞
hz1738 SRSV转化的3T3细胞) SRSV/3T3细胞
hz1739 SD大鼠骨髓间充质干细胞,SDBMSC细胞
hz1740 RD(恶性胚胎横纹肌瘤细胞) RD细胞
hz1741 NFS-60细胞,NFS-60细胞
hz1742 mouse N3 mouse N3细胞
hz1743 Mo-MuLv感染的3T3细胞,Mo-MuLv/3T3细胞
hz1744 LLC小鼠 Lewis 肺癌细胞,Lewis细胞
hz1745 Leuwis肺癌细胞,LLC细胞
hz1750 K562耐*细胞株 K562/ADP细胞
hz1751 HPVl6 E6、E7和ras基因共转化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮细胞,TC-1细胞


















