缓冲动力-硝酸盐培养基基础特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新缓冲动力-硝酸盐培养基基础中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
缓冲动力-硝酸盐培养基基础细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
缓冲动力-硝酸盐培养基基础相关产品如下:
hz0107 小细胞肺癌细胞,NCI-H446 [H446]细胞
hz0108 小鼠自发高乳腺癌细胞,TA2细胞
hz0109 小鼠子宫颈癌细胞,U14细胞
hz0110 小鼠脂肪细胞,L13T3细胞
hz0111 小鼠脂肪细胞,3T3-L1细胞
hz0112 小鼠正常肝细胞,NCTC1469细胞
hz0113 小鼠杂交瘤细胞CD25 PC61细胞
hz0114 小鼠杂交瘤细胞,ST2/o细胞
hz0115 小鼠原成骨细胞,MC3T3-E1 Subclone 14细胞
hz0116 小鼠原B细胞株 BaF3细胞
hz0117 小鼠胰腺腺泡细胞癌细胞,MPC-83细胞
hz0118 小鼠胰腺癌细胞,LTPA细胞
hz0119 小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞,Beta-TC-6细胞,
hz0120 小鼠胰岛素瘤β细胞(NOD/Lt转基因小鼠,SV40巨T抗原) NIT-1细胞
hz0121 小鼠胰岛素瘤β细胞,NIT-1β细胞,
hz0122 小鼠胰岛内皮细胞,MS1细胞,
hz0123 小鼠胰岛β细胞株 Min6细胞
hz0124 小鼠血细胞,WEHI-3细胞
hz0125 小鼠血管瘤内皮细胞,EOMA细胞,
hz0126 小鼠小胶质细胞,BV2细胞
hz0127 小鼠胃癌细胞,MFC细胞,
hz0128 小鼠网织细胞肉瘤 M5076细胞
hz0129 小鼠饲养层上皮细胞,HPT-8细胞
hz0130 小鼠树突状细胞肉瘤细胞,DCS细胞
hz0131 小鼠树突状细胞,DC2.4细胞,
hz0132 小鼠视网膜神经节细胞株细胞,RGC-5细胞
hz0133 小鼠肾足细胞,Mouse podocyte细胞
hz0134 小鼠肾小球系膜细胞,SV40 MES13细胞,
hz0135 小鼠肾小球系膜细胞,MES-13细胞
hz0136 小鼠肾腺癌细胞,RAG细胞,
hz0137 小鼠肾系膜细胞,MC53细胞
hz0138 小鼠肾上腺皮质瘤细胞,Y1细胞,
hz0139 小鼠肾集合管细胞(SV40转化) M-1细胞
hz0140 小鼠肾癌细胞株 RuCa细胞
hz0141 小鼠肾癌细胞,Kert-3细胞
hz0142 小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞,NG108-15 [ 108CC15 ]细胞