*卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新*卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
*卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
*卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)相关产品如下:hz-1437 J774A1(单核细胞巨噬细胞)
hz-1438 SPA-A1(肺腺癌细胞)
hz-1439 A673(横纹肌瘤细胞)
hz-1440 L-02(正常肝细胞)
hz-1441 7721(7721肝癌细胞)
hz-1442 SK-N-SH(神经母细胞瘤)
hz-1443 HL-60(白血病原髓细胞)
hz-1444 ScaBER(膀胱鳞癌细胞)
hz-1445 WISH(羊膜细胞)
hz-1446 H08910(卵巢癌细胞)
hz-1447 Bcap-37(乳腺癌细胞)
hz-1448 Hela(宫颈癌细胞)
hz-1449 PC-3(人前列腺癌细胞)
hz-1450 SGC7901(胃腺癌细胞)
hz-1451 786-0(肾透明细胞腺癌)
hz-1452 6T-CEM(T细胞白血病)
hz-1453 Jecket(淋巴瘤细胞)
hz-1454 JAR(胚绒毛癌细胞)
hz-1455 PC-12未分化(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤)
hz-1456 WI-38(人二倍体胚肺细胞)
hz-1457 THP-1(人单核细胞)
hz-1458 T-24(膀胱变移细胞癌)
hz-1459 A375(人类恶性黑色素瘤)
hz-1460 CHRF(人巨核细胞白血病)
hz-1461 K562(慢性髓原白血病)
hz-1462 RD(恶性胚胎横纹肌瘤)
hz-1463 CNE(鼻咽癌细胞)
hz-1464 RT4(膀胱癌细胞)
hz-1465 J82(膀胱癌细胞)
hz-1466 SHG44(胶质瘤细胞)
hz-1467 LoVo(人结肠癌细胞)
hz-1468 V79(中国仓鼠肺细胞)
hz-1469 U937(组织细胞淋巴瘤)
hz-1470 PT-67(病毒转染小鼠细胞)
hz-1471 HEL(红白血病细胞)
hz-1472 293(转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞)