Anti-Phospho-Nucleophosmin (Ser4)抗体,磷酸化核仁磷酸蛋白抗体*，瑞齐生物抗体应用于WB、IHC、IF、ELISA等实验中，*，提供完善的售前、售中、售后服务，咨询或在线客服，我们将竭诚为您服务。在RICKY，我们坚持对产品质量作不断的评估、创新和改善以确保您对我们产品的高度信任！
【产品名称】：Anti-Phospho-Nucleophosmin (Ser4)抗体,磷酸化核仁磷酸蛋白抗体
【规 格】：0.1ml/0.2ml
【浓 度】：1mg/1ml
【抗体来源】：Mouse,Rabbit or Goat
【克隆类型】：polyclonal or monoclonal
【产品类型】：一抗
【性 状】：Lyophilized or Liquid
【亚 型】：IgG
【纯化方法】：affinity purified by Protein A
【储 存 液】：0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【产品应用】：not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
【保存条件】：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Anti-Phospho-Nucleophosmin (Ser4)抗体,磷酸化核仁磷酸蛋白抗体应用于WB实验时的操作方法：蛋白提样品制备
1、 将培养液吸入至15 ml离心管中，于2500 rpm离心5 min。
2、 弃上清，加入5 ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤，然后2500 rpm离心5 min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。
3、 用枪吸干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。
4、将裂解液4℃、12000 rpm离心5 min，取上清分装于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法测蛋白浓度
SDS－PAGE电泳
1、 玻璃板对齐后放入夹中卡紧，然后垂直卡在架子上准备灌胶。
2、按前面方法配10％分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。（灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水液封时要慢，否则胶会被冲变型。）
3、 当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。再等3 min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4、 按方法配4％的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶后将梳子插入孔槽。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5、 用水冲洗浓缩胶，将其放入电泳槽中。
6、 测完蛋白含量后，计算含20-50 μg蛋白（根据自己的实验需要进行选择，没有固定的量）的溶液体积即为上样量。取出上样样品至200 μl的EP管中，加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。上样前要将样品于沸水中煮5-10 min使蛋白变性。
7、 加入足够的电泳缓冲液后开始准备上样。（电泳液至少要漫过内测的小玻璃板。）用微量进样器贴壁吸取样品，将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品（包括一孔做可视的蛋白marker）。（加样太快可使样品冲出加样孔，若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时，进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤数次，以免交叉污染）
8、电泳：浓缩胶时用80-100 V跑，到分离胶以后用150-200 V跑，总时间2 h左右，电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳，进行转膜。
转膜
1、 转一张膜需准备6张7.0～8.3 cm的滤纸和1张7.3～8.6 cm的NC膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫，用玻棒赶走气泡。在垫子上垫三层滤纸。
3、将玻璃板轻轻撬开后剥胶，除去小玻璃板后，将浓缩胶轻轻刮去。小心剥下分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除去气泡。zui后盖另一个海绵垫，合起夹子。整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。
4、将夹子放入转移槽槽中，使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2 h或40 V转移3 h。
免疫反应
1、将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1 h。
2、将一抗用TBST稀释至适当浓度（在1.5 ml离心管中）；将膜涂满一抗溶液后置于湿盒中，4℃孵育过夜，用TBST在室温下脱色摇床上洗两次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min。
3、同上方法准备二抗稀释液并与膜接触，室温下孵育1～2 h后，用TBST在室温下脱色摇床上洗两次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min，进行化学发光反应。
化学发光，显影，定影
将A和B两种试剂在保鲜膜上等体积混合；1 min后，将膜蛋白面朝下与此混合液充分接触；1 min后，将膜移至另一保鲜膜上，去尽残液，包好，放入X-光片夹中，曝光相应时间。冲洗胶片。
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