操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
中文名称:多靶点激酶抑制剂(ENMD-2076 Tartrate)
英文名称:ENMD-2076 Tartrate
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
产品货号:BJ-01X8160
ENMD-2076Tartrate是多靶点激酶抑制剂,抑制Aurora A,Flt3,KDR/VEGFR2,Flt4/VEGFR3,FGFR1,FGFR2,Src,PDGFRα的IC50值分别为1.86,14,58.2,15.9,92.7,70.8,20.2and56.4nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1291074-87-7 纯度:98.06% 分子量:525.56 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
人 LRRN3 基因全长ORF克隆人基质金属蛋白14(MMP-14)免疫试剂盒现货供应
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人 CYR61 基因全长ORF克隆人基质金属蛋白10(MMP-10)免疫试剂盒进口、分装
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多靶点激酶抑制剂(ENMD-2076 Tartrate)LIMK和ROCK2抑制剂(LX7101) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg LX7101OGY琼脂 OGY Agar 250g
细胞内活性氧(ROS)抑制剂(BAPTA) 1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg BAPTA1g Lysozyme, Egg White -20℃保存
JNK抑制剂(D-JNKI-1) 1mg|5mg|10mg|50mg D-JNKI-150T 毛滴虫PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
核视网膜酸受体γ(RAR-γ)激动剂 1mL(10mM)|5mg|10mg|100mg Palovarotene5mL 髓核细胞生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
Na+/Ca2+交换体(NCXrev)反向抑制剂 1mL(10mM)|10mg|50mg KB-R7943 mesylate500mL Blotto-Antifoam in TBS with azide Blotto-Antifoam in TBS with azide 常温保存
α-ketoglutarate dehydrogenase抑制剂 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg Succinyl phosphonate50次 DNA电泳分子量标准(pUC19/MspI) DNAMETER(3) 4℃保存
S1P1受体高效激动剂(Siponimod) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Siponimod500mL Wash Buffer,pH8.0 Wash Buffer,pH8.0 常温保存
serine/cysteine protease抑制剂 1mL(10mM)|100mg|500mg PMSF支原体肉汤培养基 Mycoplasma Broth Medium 250g
serine protease抑制剂(AEBSF) 1mL(10mM)|100mg|200mg AEBSF1瓶 Fox-NY细胞株 Fox-NY 低温运输和保存
AMPK激活剂(A-769662) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg A-769662含225ml7.5%氯化钠肉汤均质袋 7.5% NaCl Broth 10个/包
芳香烃受体(AHR)激动剂(FICZ) 1mL(10mM)|1mg|5mg FICZ500 U 限制性内切DpnI Restriction Endonuclease -20℃保存