细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
中文名称:GSK-3β抑制剂(Indirubin-3-monoxime)
英文名称:Indirubin-3-monoxime
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
产品货号:BJ-01X7963
Indirubin-3-monoxime是一种有效的GSK-3β抑制剂,相对较弱的5-Lipoxygenase抑制剂,IC50值分别为22nM和7.8-10μM;同时对CDK5/p25和CDK1/cyclin B也有作用,IC50值分别为100和180nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :160807-49-8 别名:Indirubin-3-oxime 纯度:99.70% 分子量:277.28 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
人 DEK 基因全长ORF克隆小鼠胺氧化(含黄素)A(MAOA)免疫试剂盒进口、组装
人 PDS5B 基因全长ORF克隆小鼠癌胚抗原(CEA)免疫试剂盒进口、分装
人 TBCE 基因全长ORF克隆小鼠阿立新A(Orexin A)免疫试剂盒现货供应
人 BAIAP2 基因全长ORF克隆小鼠γ突触核蛋白(SNCG)免疫试剂盒*直销
人 CYP11A1 基因全长ORF克隆小鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)免疫试剂盒进口、组装
人 MSL3 基因全长ORF克隆小鼠γ干扰素受体(IFN-γR)免疫试剂盒进口、分装
人 DPYS 基因全长ORF克隆小鼠γ干扰素(IFN-γ)免疫试剂盒现货供应
人 BAIAP2L2 基因全长ORF克隆小鼠γ分泌免疫试剂盒*直销
人 HINFP 基因全长ORF克隆小鼠γ氨基丁酸(GABA)自身抗体IgG 免疫试剂盒进口、组装
人 DHCR24 基因全长ORF克隆小鼠γ氨基丁酸(GABA)免疫试剂盒进口、分装
人 KIAA0141 基因全长ORF克隆小鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)免疫试剂盒现货供应
GSK-3β抑制剂(Indirubin-3-monoxime)BLM解螺旋酶抑制剂(ML216) 5mg|10mg|25mg|50mg ML216素B Polymyxin B 2.25万单位*5支
DNA连接酶抑制剂(L67) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg L672 ug P416 GPD P416 GPD 低温运输,-20℃保存
Nrf2激活剂(NK-252) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg NK-252250mL Raffinose Solution(棉子糖溶液),20% Raffinose Solution,20% 常温保存
FPTase和GGPTase-I双重抑制剂(L-778123 hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg L-778123 hydrochloride1 管 JM105大肠杆菌 JM105 E.coli Strain -80℃保存
FGFR抑制剂(FIIN-2) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg FIIN-22 ug pQE-80L pQE-80L 低温运输,-20℃保存
单酰基甘油脂肪酶(MGL)抑制剂(Pristimerin) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg PristimerinHBI变形杆菌生化鉴定条(GB) 5条/盒
EGFR抑制剂(AZ-5104) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg AZ-51042 ug pcDNA3 Flag pcDNA3 Flag 低温运输,-20℃保存
ERK1/2和STAT3信号通路抑制剂(Mogrol) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg MogrolDRBC琼脂 DRBC Agar 250g
CDK8抑制剂(CCT-251921) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg CCT-25192110g ( 蛋黄 ) L-α-Lecithin -20℃保存
Wnt抑制剂(JW74) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg JW7450T 马流感病毒H3N8型PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
凋亡信号调节激酶1(ASK1)抑制剂(NQDI-1) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg NQDI-11瓶 P388D1(IL-L)细胞株 P388D1(IL-L) 低温运输和保存