人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法：
1)目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照；与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。
3)以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性；P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑；P／N小于1．5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给客户带来一些启发，提高试验质量。
51160 MID2/RNF60/Midline-2 环指蛋白60抗体 0.2ml
51161 RP1/DCDC4A 视网膜色素变性蛋白1抗体 0.2ml
51162 STAU2 双链RNA结合蛋白Staufen2抗体 0.2ml
51163 Gliomedin/COLM 神经胶质蛋白(肝癌相关基因2)抗体 0.2ml
51164 KIF1B 驱动蛋白家族成员1B抗体 0.2ml
51165 MYBPC1 肌球蛋白结合蛋白C抗体 0.2ml
51166 Neurexin 1 轴突蛋白1(Neurexin 1α)抗体 0.2ml
51167 TANC1 TANC1蛋白抗体 0.2ml
51168 MYRIP/SLAC2-C MYRIP蛋白抗体 0.2ml
51169 Amisyn 突触融合结合蛋白6抗体 0.2ml
51170 Bestrophin 卵黄状黄斑病蛋白抗体 0.2ml
51171 Bestrophin 2 卵黄状黄斑病蛋白2抗体 0.2ml
51172 Bestrophin 3 卵黄状黄斑病蛋白3抗体 0.2ml
51173 Bestrophin 4 卵黄状黄斑病蛋白4抗体 0.2ml
51174 C1QL1 补体组分1q子成分样蛋白1抗体 0.2ml
51175 CHL1/CALL 神经细胞粘附分子CALL抗体 0.2ml
51176 COL6A5/Collagen VI alpha 5 6型胶原蛋白α5抗体 0.2ml
51177 CPA6 胰羧肽酶A6抗体 0.2ml
51178 GJC2/Connexin 47 间隙连接蛋白47抗体 0.2ml
51179 Sin3b 转录抑制蛋白Sin3b抗体 0.2ml
51180 HAPLN2 透明质酸及粘蛋白2抗体 0.2ml
51181 HAS3 透明质酸合成酶3抗体 0.2ml
51182 KAL1 卡尔曼综合征基因1抗体 0.2ml
51183 Keratocan 细胞角膜蛋白多糖抗体 0.2ml
51184 Laminin alpha 4 层粘蛋白α4抗体(Lamininα4) 0.2ml
51185 Laminin alpha 4 层粘蛋白α4抗体(Lamininα4) 0.2ml
51186 Ligamentum Nuchae Elastin 项韧带弹性蛋白抗体 0.2ml
51187 APBA3/Mint3/X11gamma β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体 0.2ml
51188 NTN3/Netrin-3 轴突生长诱导因子3抗体 0.2ml
51189 Sphingomyelin Synthase 1 鞘磷脂合成酶1抗体 0.2ml
51190 OTOA/DFNB22 耳聋、常染色体隐性遗传22抗体 0.2ml
51191 OLFM3/Optimedin 嗅球蛋白3抗体 0.2ml
51192 SMS2/Sphingomyelin Synthase 2 鞘磷脂合成酶2抗体 0.2ml
51193 PSCDBP/CYTIP 胞粘蛋白结合调节蛋白抗体 0.2ml
51194 Plakophilin 2 桥粒斑菲素蛋白2抗体 0.2ml
51195 SPON2/M spondin/Mindin 细胞外基质底物反应蛋白2抗体 0.2ml
51196 SNTG2/Syntrophin 5 肌蛋白结合蛋白γ2抗体 0.2ml
51197 DOK6 胞浆接头蛋白Dok6抗体 0.2ml
51198 TECTB 遗传性耳聋β-tectorin抗体 0.2ml
51199 TNR/Tenascin-R 腱糖蛋白R抗体 0.2ml
51200 procollagen type IIA Ⅱ型胶原α1抗体 0.2ml
51201 AMIGO1 粘附分子IgG样结构域蛋白1抗体 0.2ml
51202 ANTXR2 炭疽毒素受体2抗体 0.2ml
51203 ASTN2 星形肌动蛋白抗体 0.2ml
51204 CDH18 钙粘附分子18抗体 0.2ml
51205 CNTN4/AXCAM 轴突相关粘附分子抗体 0.2ml
51206 CNTNAP3 接触蛋白相关蛋白3抗体 0.2ml
51207 CNTNAP4 接触蛋白相关蛋白4抗体 0.2ml
51208 Cadherin 8 钙粘附蛋白8抗体 0.2ml
51209 Cadherin 8 钙粘附蛋白8抗体 0.2ml
51210 Cadherin 9 人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒钙粘附蛋白9抗体 0.2ml
51211 MPZL2/EVA1 髓鞘蛋白P0样蛋白2抗体 0.2ml
51212 HDL/high density lipoprotein 高密度脂蛋白抗体 0.1ml
51213 ARSB 芳基硫酸酯酶B抗体 0.2ml
51214 CDHF15/FAT3 钙粘蛋白15抗体 0.2ml
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法：
1 选择试剂：选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样：可能原因：
1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；
2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法：
1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒*混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时，请分批操作。
3 孵育：可能原因：
1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；
2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。解决办法：
1) 贴封片或加盖；
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板：可能原因：
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法：
1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；
2) 合理安排，或多用几台洗板机。
5人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒显色：可能原因：
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法：
1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流；
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止：可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板：如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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