PCR反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
参数规格：
产品名称：牛型放线菌LAMP试剂盒
英文名称：Lamp kit for bovine Actinomycetes
货号：BJ-P987424
产品规格：50T
分类：荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
产品特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
样品要求及注意事项：
1、 如果提供实验材料，实验材料必须保证新鲜，请您采样后立刻放入液氮中速冻或加入样稳定剂，并用干冰运输。
2、 如果样品可以用Trigol法提总RNA ，也可以将样品研磨后放在 Trigol中，动植物组织 ： 50～100mg/mlTrigol，贴壁细胞：10cm2/mlTrigol，悬浮细胞：5×106动植物，酵母细胞或细菌细胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我们要对您提供的材料进行评估。
4、 实时荧光定量PCR服务您一定要提供样品及要扩增基因的详细信息。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
25g嗜热脂肪地芽孢杆菌Human LDLRAD1 ELISA Kit
5g枯草芽孢杆菌Human LDOC1 ELISA Kit
10MG矩圆黑盘孢Human LEF1 ELISA Kit
1mg鲑色锁掷酵母Human LGR6 ELISA Kit
5mg肠道致病性大肠埃希氏菌Human LCOR ELISA Kit
5mg梭菌Human LCORL ELISA Kit
5MG不动杆菌属Human LCTL ELISA Kit
1g爪哇根霉Human LDB3 ELISA Kit
250mg酿酒酵母Human LDHAL6A ELISA Kit
25g毕赤酵母Human LDB1 ELISA Kit
5g鸭疫里氏杆菌Human LDLRAD1 ELISA Kit
1g烬灰红链霉菌烬灰红亚种Human LDOC1 ELISA Kit
5g伪狂犬病病毒Human LEFTY2 ELISA Kit
10mg运动节杆菌Human LEF1 ELISA Kit
50mg褐顶环柄菇Human LCTL ELISA Kit
100mg枯草芽孢杆菌Human LDB1 ELISA Kit
1g米曲霉Human LDB3 ELISA Kit
牛型放线菌LAMP试剂盒改良Y培养基人滑膜细胞脑微血管内皮细胞DCP peptide 异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原抗原
梭菌增菌培养基人髓核细胞眼晶状体上皮细胞MMP-9(matrix metalloproteinase 9) 基质金属蛋白酶-9(抗原)
R2A 琼脂人纤维环细胞视网膜微血管内皮细胞AGER(Advanced glycosylation end product-specific receptor) 晚期糖基化终末产物特异性受体(抗原）
厌氧液体培养基人肝窦内皮细胞小梁网细胞14-3-3 protein 14-3-3 蛋白（多肽抗原）
厌氧琼脂人肝内胆管上皮细胞视网膜色素上皮细胞14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris)) 植物14-3-3蛋白抗原
双歧杆菌生化用基础培养基人肝细胞视网膜muller细胞FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白
EC-MUG培养基人肝星形细胞虹膜色素上皮细胞AIF (Apoptosis-Inducing Factor) 调亡诱导因子(多肽片断抗原）
MUG营养琼脂（NA -MUG）人脾脏内皮细胞角膜上皮细胞Adenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1
注意事项:
1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
