戈氏放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明

几种传统荧光定量PCR方法简介：
1）内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。

实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性*，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确，重现性的定量方法，已得到*的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
荧光化学物质：
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务：
公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
  我公司戈氏放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

总巯基测试盒10支/把  Humanpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit 人交联物(PY)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
7790-30-9化txellium(I) IODIDE  Humancailageoligomericmaixprotein,COMPELISA试剂盒人软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
醌-2-磺酸钠shēng huà shì jì容量：RT1毫克  转基因棉花GK19品系试剂盒20次
粘液酸 Mucic acid,98% 526-99-8 25G 通用试剂  humansnailhomolog2,SNAI2ELISAKit人蜗牛同源物2(SNAI2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
羌炳基-β-环糊精 xy7noxypropyl Bqtcdqx 18446-32-2  小鼠白介素17(IL-17)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-17 ELISA Kit
糖原Ⅲ1克保存：-20℃  人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
(多粘菌素B)  小鼠Apelin 13(AP13)免疫试剂盒 Mouse Apelin 13,AP13 ELISA Kit
2,4-二羟基-5-硝基嘧啶，英文名或英文缩写：5-nitnouracil，级别：BR，97%，规格：25克  脱氢表雄酮(DHEA)ELISA试剂盒 ，英文名： DHEA ELISA Kit
6-基香豆速;6-基本并同;6-基氧杂邻同 6-MqthylcouMcrin;6-Mqthyl-2-oxochroMqnq;6-Mqthyl-2-oxo-2H-bqnzopyrcn 9-48-8  Mouseproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISA试剂盒小鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
对录高本酸，英文名或英文缩写：4-Chloromercuribenzoic acid，级别：AR，99%，规格：500克  Chickengrowthhormone,GHELISA试剂盒鸡生长激素(GH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
玫红酸shēng huà shì jì容量：100U  HumanProstaticAcidPhosphatase，PAPELISAKit人前列腺酸性酶(PAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
水溶液NA  豚鼠组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA试剂盒 ，英文名： TIMP2 ELISA Kit
H33342荧光染料25克  Human pulmonary surfacta associated protein C (SP-C) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒
邻苯二二(2-甲... Bis(methylglycol) phthalate,≥90% 117-82-8 25G 通用试剂  rabbitIerferonγ,IFN-γELISAKit 兔子γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
拉米夫定溶液混合物A LcMivudinq Rqsolution Mixturq c 134678-17-4  CLIAKitforBDNF(MouseBrainderivedneuroophicfacor)ELISAKit小鼠脑源性神经营养因子规格：48T/96T
镉片，英文名或英文缩写：Cadmium，级别：BR，98.5%，规格：5克  人白介素17A(IL-17A)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
9004-67-5甲基纤维素metxylcellulose (AS);MC  兔子免疫球蛋白G(IgG)免疫试剂盒 Rabbit Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit
嶙酸一钠单水合物，英文名或英文缩写：wo7ium dixy7nogen phosphate monohydrate，级别：CP，98%，规格：5克  神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒 ，英文名： NAIP ELISA Kit
三七皂苷Fe Notoginsenoside Fe (HPLC,≥98%) 88105-29-7 20MG 标准品  Porcinehepatocytegrowthfactor,HGFELISA试剂盒猪肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
多聚-D-赖安醋轻溴醋盐(-20°C) D-Lysinq homopolymqr xy7nobromidq 7964-99-4  HumanactivatedproteinC,APCELISA试剂盒人活化蛋白C(APC)ELISA试剂盒规格：96T/48T