细胞培养操作规程;
一.人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
以下是人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书的订购信息;
人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书 【Human Peritoneal : Normal Peritoneal Capillary Endothelial Cell Derivatives】
人腹膜毛细血管内皮细胞提取物是从人腹膜毛细血管内皮细胞提取的,人腹膜毛细血管内皮细胞从正常人腹膜组织制备。正常人腹膜组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
发货:客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司科技提供的细胞有标准的鉴定流程,保证细胞的纯度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基;2、说明书及注意事项;3、公司售后服务标准。
保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
细胞培养的优点
1人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
注意事项;
1. 人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书一般客户拿到细胞后,应该注意什么?
客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
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水稻水培养液250g用于水稻的水培养液
Bacto? Peptone incubation media Bacto? Peptone
地衣形芽孢杆菌 人造肉酵母 支/瓶
SalmonellaShigellaAgar
CandidaElectiveAgar
水稻赤霉菌培养基250g用于水稻中赤霉菌培养
脱脂奶粉 用于制备微生物培养基。该类培养基一般用于保存和增殖乳酸菌 500g incubation media 脱脂奶粉 用于制备微生物培养基。该类培养基一般用于保存和增殖乳酸菌 500g
地衣芽孢杆菌 产抗生素 支/瓶
HE琼脂平板(9cm)用于沙门氏菌的选择性分离培养
DTM培养基 250g 用于食品中真菌的培养
AgarmediumO(Baird-Parkeragar)
BAIRD-PARKER 贝尔德-帕克琼脂/葡萄状球菌选择培养基 incubation media BAIRD-PARKER 贝尔德-帕克琼脂/葡萄状球菌选择培养基
溴化十六烷基铵琼脂培养基 250g 用于绿脓杆菌及其它革兰氏阴性非发酵菌的选择性分离培养。(《中华人民共和国药典》2010年版)
亚碲酸血琼脂基础PotassiumTelluriteBloodAgarBase用于白喉杆菌的分离培养
双歧杆菌琼脂培养基 250g 用于双歧杆菌的分离培养
NRG1 Others Human 人 NRG1-alpha (EGF Domain) 人细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0231TE-1(人食管癌细胞)5×106cells/瓶×2
小鼠淋巴成纤维细胞*培养基 100mL
MADB-106大鼠癌细胞 Breast cancer cells of MADB-106 rats 1640+10% FBS
IL1RN Protein Human 重组人 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 标签)
Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2 AAV-293( 胚肾细胞)TE-10(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2
人脐血间质干细胞 Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells
LY86 Others Human 人 LY86 / MD-16 人细胞裂解液 (阳性对照)
HOS细胞,人骨肉瘤细胞 皱褶青霉 人胚肺细胞系;KuMA
人膀胱上皮永生化细胞;SV-HUC-1
HMy2.CIR(人B淋巴母细胞) 5×106cells/瓶×2 mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞 人皮肤成纤维细胞;HSAS4
人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106
EPHB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人细胞裂解液 (阳性对照)
腹膜毛细血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
HCT-116细胞,低分化结肠腺癌细胞 人子宫内膜腺癌细胞,HEC-1-A细胞 人肺成纤维细胞cDNAHPF cDNA
长尾绿猴肾细胞;4647
HAPLN1 Others Human 人 HAPLN1 人细胞裂解液 (阳性对照)