我们采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8，敏感性可达156Pg/ml，操纵简朴 ，重复性良好，可用于IL-8的基础和临床研究。在严峻感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8。此外，近年来的研究表明，IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关，包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。封锁液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存，注意事项待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。原理采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株(4D7)作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。试剂器材包括ELISA试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、尺度品，底物(ABTS)、96孔ELISA板。Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。
夹心法ELISA用于检测IL-8操作步骤
1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml，加入96孔板，100μl/孔，放4℃，36小时。
2. 封闭：0.1％吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3％BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃，1小时。
3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃，3小时。
4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次，3％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃，1小时。
5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)，0.2mg/ml，加3％H2O2，2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
生物科研试剂质量的优劣会直接影响科研结果的正确性，夹心法ELISA用于检测IL-8劣质的ELISA试剂盒使得实验的可靠性经常得不到很好的保证，所以加快生物科研试剂的立异和发展，全面晋升科研试剂的质量，将有利于更好地保障科研结果，并且有利于完善我国体外诊断试剂行业的工业化链条。公司具有良好的市场信誉，专业的销售和技术服务团队，迎得了海内外厂商的*，来涵洽商交流！
