在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，买前要和技术人员详细沟通，有些产品分类很细，同一个项目会有几个ELISA试剂盒。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开，再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保存其免疫学活性，又保存酶的活性。关于抗凝血和得到的血清血浆体积的关系，大致上比例是1毫升全血可以得到500 ul 血清或血浆。
由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。需要的样本量取决于你的检测项目，有些检测项目需要血清做1:100稀释，甚至是更高的稀释度，那么几微升血样就够了，有些项目只能做较低的稀释，甚至不稀释，这样的话每孔会需要100 ul 左右。购买elisa试剂盒首先要注意有效期，尽量买刚出厂不久的。大家更多的了解试剂盒无非就是担心实验能否成功，ELISA试剂盒结果出来以后如何解释。只要是商品化试剂盒，都是比较稳定的，但是ELISA试剂盒一般检测抗原不如检测抗体准确度高。
