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丰寿讲堂：操作细胞复苏应该留心哪些！

阅读：202发布时间：2020-1-9

初学者操作细胞复苏时易犯错误：

1. 水浴锅未预热或许未预热到37℃。

2. 水浴锅内冻存管太多，导致传热欠安，使融化时间延伸。​
3. 离心前遗忘平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

4. 次复苏细胞过多，遗忘替换吸头和吸管，导致细胞穿插污染。

【留心事项】

1. 取细胞的进程中留心带好防冻手套，护目镜。细胞冻存管或许漏入液氮，冻住时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆破。

2. 常温下二甲基亚砜对细胞的副作用较大，因而，必须在1-2 min内使冻存液*融化。假设复苏温度太低，会构成细胞的危害，所以挑选40℃复苏。

3. 贴壁细胞复苏实验规范流程是将冻住后的细胞悬液行离心，以去除冷冻维护液DMSO对细胞的危害，但是离心也会对刚复苏的状况欠佳的细胞发作危害。

【操作留心】

1.可以提前把需求的体积的培养液放到培养瓶里，拧松瓶盖，放到孵箱里半小时到1小时，这样温度和ph值都已经适合细胞生长了。

2.为防止冻存管在升温时爆裂等，可以在放入水浴前就实现在超净台里把盖子拧松一下然后再拧上。从液氮罐里拿出来不是说一定要争分夺秒地放入水浴。

3.水浴温度40C应该也没问题，但正规的protocol上历来都只说37C。横竖应该相差不大，但不能太高了。另外，不必等细胞全化了再从水浴里取出来。只需冰块浮起来了就差不多了


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