一、细胞传代
1. 试验预备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培育皿，离心管。
2. 弃掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗刷两次。
3. 用Tip头参加1ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。用手轻拍培育瓶壁，观察到细胞*从壁上脱落下来为止。
4. 参加1ml的含血清培育基停止反应。
5. 用Tip头多次吹吸，使细胞*分散开。
6. 将培育液装入离心管中，1000rpm离心5min。
7. 用培育液重悬细胞，细胞计数后挑选0.8X106个细胞参加一个35mm培育皿。
8. 将适宜体积*培育液参加离心管中，混匀细胞后轻轻参加培育皿中，使其均匀分布。
9. 将培育皿转入CO2培育箱中培育，第二天转染。
二、细胞转染
1. 转染试剂的预备
① 将400ul去核酸酶水参加管中，震动10秒钟，溶解脂状物。
② 震动后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震动。
2. 挑选适宜的混合份额（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中参加适宜体积的无血清培育基。参加适宜质量的MyoD或者EGFP的DNA，震动后在参加适宜体积的转染试剂，再次震动。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培育板中的培育基，用PBS或者无血清培育基清洗一次。
5. 参加混合液，将细胞放回培育箱中培育一个小时。
6. 到时后，依据细胞品种决定是否移除混合液，之后参加*培育基持续培育24－48小时。
三、第二次细胞传代
1. 在转染后24小时，观察试验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。
2. 再次进行细胞传代，依照免疫染色适宜的密度0.8X105个细胞/35mm培育皿将细胞重新转
入培育皿中。
3. 在正常条件下培育24小时后依照染色要求条件固定。
