ELISA试剂盒滴加底物溶液后，底物可在酶效果下使其所含的供氢体由无色的还原型成为有色的氧化型，ELISA检查试剂盒呈现色彩反响。因此，可通过底物的色彩反响来判定有无相应的免疫反响，色彩反响的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。实际上每一测定体系应该用试验求出各自的S/N的阈值。
更应留心的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。现在主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您运用的类型须取决于多个要素，包含微孔板的 外表ELISA检查试剂盒、吸附的抗原、您的抗体和检查试剂。好的封闭液应降低非特异性联络，但它不应当与抗原、抗体或检查试剂发作互相效果。
常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、安稳，在去掉洗刷过程中的一些非特异联络上很有用。
ELISA试剂盒测定方法中有三个必要的试剂：
1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸剂"（immunosorbent）；
2）酶符号的抗原或抗体，称为“酶联物"、“联络物"（conjugate）；
3）酶反响的底物。依据试剂的来历和标本的状况以及检查的具体条件，可规划出各种不同类型的检查方法。
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所致使的盛行症、ELISA检查试剂盒寄生虫病及非盛行症等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，依据现已运用的效果，认为ELISA试剂盒法具有活络、特异、简略、灵敏、安稳及易于自动化操作等特征。
有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反响后发作的本底或许较正常人血清的本底低得多。ELISA试剂盒在试验条件（包含试剂）较难保证安稳的状况下，这种差异法较为合适。
