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ELISA实验办法之竞争法检测抗原

阅读：1139发布时间：2019-7-16

竞争法检测抗原
    
当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点，因而不能用双抗体夹心法进行测定，能够采用竞争法形式。经洗刷后分红两组：一组加酶符号抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶符号抗原，再经孵育洗刷后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的不知道抗原的量。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
   
竞争法的扼要操作过程：
    
1）先参加抗体，使抗体固定结合于载体表面；
   
2）参加梯度浓度份额的待测样品与酶标抗原混合物,同时做只加酶标抗原的对照组；
   
3）参加酶促反响底物，发作显色反响，对比实验组及对照组的显色差异，计算不知道抗原的量。
    
双抗原夹心法检测抗体
    
双抗原夹心法的反响形式与双抗体夹心法相似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原替代酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因而其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找适宜的符号办法。
    
双抗原夹心法的扼要操作过程为：
   
1）先参加抗原，使抗体固定结合于载体表面；
    
2）再加样品，使方针检测抗体构成抗原-抗体复合物；
    
3）加酶标抗原；
    
4）参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。


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