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丰寿浅谈:在科研ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚

阅读:79发布时间:2019-7-8

1、科研ELISA试剂盒标本的采纳和保存

可用作科研ELISA试剂盒测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同即是血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清天然凝结、xue块缩短后即可获得。除特殊情况外,在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等使用。血清标本可按惯例方法收集,应留心防止溶血,红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本或许会增加非特异性显色。

血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中或许含有内源性HRP,也会发生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其间的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超越一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质部分浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,防止气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价下跌,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少数分装冰存。保存血清自收集时就应留心无菌操纵,也可加进适当防腐剂。

2、科研ELISA试剂盒试剂的准备

按试剂盒说明书的要求准备试验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或往离子水,包含用于洗刷的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液使用pH计丈量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

3、科研ELISA试剂盒加样

在科研ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留心不行溅出,不行发生气泡。

加标本一般用微量加样器,按规则的量加进板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加进稀释液,再在其间加进血清标本,然后在微型震动器上震动1分钟以保证混和。加酶结合物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器,使加液进程敏捷完结。 


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