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技术文章

有关细胞有丝割裂的试验方法

阅读:147发布时间:2019-6-27

(一)试验原理
    
细胞有丝割裂指数(mitotic index,MI)是指归于割裂期的细胞占总细胞数的百分率.用于表明细胞增殖旺盛的程度,也可用于检测药物对细胞增殖能力的影响。用盖玻片培育法培育细胞,做固定和染色后,镜下调查和计数1000个细胞中处于割裂期的细胞数并核算MI。

(二)资料

1.待检资料(药物)。

2.细胞培育成层的贴壁细胞。

3.试剂 甲醇、3%吉姆萨染液。

4.器件CO2培育箱、倒置显微镜、盖玻片(2.2 cm×2.2 cm,需预先清洗和灭菌处理)、塑料培育皿(3.5 cm)、载玻片、封片用盖玻片、中性树胶。

(三)试验方法

1.将细胞消化成单个细胞悬液,将细胞悬液分瓶培育,分成不加药的对照组和加人不同剂量药物的试验组。

2.细胞传代培育的方法培育细胞,并制成浓度为105/ml的细胞悬液。

3.将清洗和灭菌处理的盖玻片放置在塑料培育皿中,将细胞悬液摇匀后接种于培育皿中,各皿中接种量相同。

4.分别于培育24 h、48ht和72h后从培育皿中取出盖玻片,在Hanks液中漂洗2~3次。

5.先用甲醇固定30 min,再用吉姆萨染液染色。晒干后用中性树胶封片。

6.油镜下或高倍镜下计数1000个细胞中处于割裂期的细胞数。

7.核算MI按下列公式核算MI。

(四)成果与分析
    
将对照组和药物组的试验成果绘制成直方图并加以比较,也可绘制成MI曲线进行比较:

(五)注意事项

1.为了削减差错,试验者有必要了解各期割裂象细胞的形状特征,该试验自始至终由一人完结,当两人以上调查时,应掌握相同的标准。

2.MI曲线与细胞生长曲线趋势根本相似,但不*相同。如果在细胞增长达饱满密壁并进入中止期后.细胞数量许多,而割裂象细胞可*消失。

3.细胞在盖玻片上的密度常不均匀,细胞密集区与区的割裂象细胞数目或许不同。计数时要选择密度近似区,以削减试验差错。


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