ELISA试剂盒测定步骤：固相包被→加待测样品→温育→洗刷+加酶标物→温育→洗刷→加底物→温育一加停止液→比色→判定成果。
ELISA试剂盒操作较繁杂,在操作中应留意以下5个方面。
1. 跟着病情的进展或由其他因素影响，某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
2. 加样一般运用加液器，在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加停止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶结合物、底物和停止液时则不需更换吸嘴。
3. 在成批手艺检测中，还应留意操作时差的影响。加样及混匀时刻的差异，使抗原抗体反响和酶促反响时刻不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留意可能会导致错误成果或定量不准。
4. 洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决定试验胜败的一个关键步骤。意图是除去未结合的免疫反响物，停止抗原抗体反响，除去标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手艺洗板，前者洗刷质量较好，各反响孔洗刷作用均一，批内、批间差异小，手艺洗板应留意操控各孔洗刷作用，差异不宜太大。
5. 判定成果须运用ELISA试剂盒测读仪，比色法判读可选择单波长或双波长，依据反响液色彩的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。
