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技术文章

关于细胞培养基的形态分类及污染消除

阅读:154发布时间:2019-6-25

体外培养基细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征,可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞,常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。


1、成纤维型细胞

在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时,皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名,细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长,细胞*有卵园形核,胞质向外伸出2-3厘米个长短不同的突起,除真正的成纤维细胞外,凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。

2、上皮型细胞

此类型细胞在培养基器皿支持物上生长具有扁平不规则多角形特征,细胞*有园形核,细胞紧密相连单层膜样生长。起源于内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等组织细胞培养时,皆呈上皮型形态生长。

3、游走型细胞

本型细胞在支持物上散在生长,一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起,呈活跃的游走或变形运动,速度快且不规则。此型细胞不很稳定,有时亦难和其它型细胞区别。在一定的条件下,由于细胞密度增大联成片后,可呈类似多角型或成纤维细腻包形态。常见于羊水细胞培养的早期。

当重要的培养基污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。

高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

1)在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

2)分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养基瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,*推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。

3)每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。

4)确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。

5)在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

6)重复步骤4。

7)在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。


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