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货号 | A01X2166 | 规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
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种属来源 | 兔 | 用途 | 仅供科研实验 |
品牌 | 抚生 |
一、细胞基本属性
产品名称 | 产品规格 | 商品货号 |
兔骨膜干细胞 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | A01X2166 |
二、使用方法:
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml培养基重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
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细胞培养注意事项:
公司产品仅用于科研关于原代细胞培养的注意事项。原代细胞培养是一项非常重要的实验技术,掌握好这些注意事项,能让你的实验更顺利。
首先,无菌操作是关键。一定要保持操作环境的清洁,避免细菌或霉菌污染,否则实验就会失败。
其次,选择适合的培养基和血清也很重要。不同细胞对培养基和血清的需求不同,所以要根据细胞类型来选择合适的培养基和血清。
另外,也是细胞培养中的成分。要新鲜配制,在贮存过程中也要定期补充。
在细胞培养过程中,静置培养也是非常重要的。细胞在消化分离后需要一定的时间来适应新环境,所以在这段时间内要避免频繁取出培养瓶观察。
此外,消化时间也要控制得当。通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可,过长的消化时间会导致细胞损伤加重,影响细胞培养成活率。
最后,对于一些特殊类型的细胞,可能需要添加一些特殊的生长因子来促进细胞生长和增殖。但需要注意的是,这些生长因子的费用通常较高。
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