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货号 | FS-01S63366 |
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产品属性:
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
NiR亚硝酸还原酶检测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/48样 | FS-01S63366 |
商品介绍:
测定意义
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少,即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。
产品内容:
公司产品仅用于科研酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 1.5mL×1 支,4℃保存
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 1.6mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 1.9mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂五:液体 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。
操作步骤:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
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NiR亚硝酸还原酶检测试剂盒微量法月桂甲酯 99%邻二甲 Standard for GC, ≥99.5% (GC)Anti-E.coli DH-5 Alpha DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体
月桂甲酯 Standard for GC,≥99.5% (GC)1,2-二氯烷 99%Anti-E.coli O157:H7 大肠杆菌埃希氏菌O157抗体(肠出血性大肠杆菌埃希氏菌O157:H7)
十二甲酯 分析标准品异佛尔酮 97%Anti-EPEC/E.coli 肠致病性大肠杆菌抗体
甲基环戊烯酮 98%四氯乙烯 Standard for GC, ≥99.9% (GC) Anti-E.coli/EPEC 抗普通大肠埃希菌菌体蛋白抗体
3-甲基戊 99%四氯乙烯 AR,98%Anti-E.coli O139 抗志贺大肠杆菌O139抗体(仔猪水肿病志贺大肠杆菌O139)
3-甲基戊 ≥98%, FG四氯乙烯 CP,97%Anti-EP3 前列腺E受体3抗体
邻基甲甲酯 99%四氯乙烯 GR,99.5%Anti-Ephrin A1 EphA1抗体
邻基甲甲酯 ≥98%, FCC,FG四氯乙烯标准溶液 1000μg/ml,溶剂:甲Anti-EphA4 酪蛋白激A4抗体
注意事项:
1、操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时,建议稀释后测量,计算公式中应当乘以稀释倍数。
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