ICDHm线粒体异柠檬酸脱氢酶微量法 返回列表页

商品介绍：

测定意义

ICDHm（EC 1.1.1.41）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，同时将NAD+ 还原为NADH，是三羧酸循环的限速酶之一，其催化的反应是细胞NADH主要来源之一。

测定原理

ICDHm催化NAD+ 还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品属性：

产品内容：

酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

碱性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 1.5mL×1 支，4℃保存

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.6mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；

试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 1.9mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；

试剂五：液体 0.7mL×1 支，4 ℃保存；

试剂六：液体 10mL×1 瓶，4 ℃保存；

试剂七：自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。

NAD 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。

NADH 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。

操作步骤：

一、NAD+和 NADH 的提取：

1、血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min；取上清 200uL，加入等体积碱性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

NADH 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 碱性提取液，煮沸 5min(盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

2、组织中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积碱性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 碱性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。

注意事项：

1、公司产品仅用于科研操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。

2、反应过程要注意避光。

3、当吸光值大于 1 时，建议稀释后测量，计算公式中应当乘以稀释倍数。

下列是公司正在热销的产品：

MEK1;2大鼠胰高血糖样肽1mitogen-activated protein kinase kinase 1

细胞外信号调节激小鼠β干扰extracellular signal-regulated kinase 1;2

丝裂原活化蛋白激大鼠胆囊收缩/肠促肽mitogen activited protein kinase

真核起始因子结合蛋白1抗神经节抗体Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1

含ETS域Elk1蛋白小鼠肌钙蛋白ⅠETS domain-containing protein Elk-1

丁酰胆酯大鼠脑肠肽Butyrylcholinesterase

丁酰胆酯抗髓鞘相关糖蛋白抗体Butyrylcholinesterase

丁酰胆酯小鼠血清淀粉样蛋白AButyrylcholinesterase

碳酐小鼠抗中性粒/中心体抗体carbonic anhydrase

环加氧2大鼠6酮前列腺cyclooxygenase-2

葡萄糖苷抗中性粒颗粒抗体glucosidase

C1q肿瘤坏死因子相关蛋白13抗中性粒抗体C1q And Tumor Necrosis Factor Related Protein 13

魏氏梭菌小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白Clostridium perfringens type

果胶甲酯大鼠载脂蛋白A1RAPIDASEPEP RAPIDASE

基质金属蛋白13大鼠载脂蛋白B100matrix metalloproteinase 13
ICDHm线粒体异柠檬酸脱氢酶微量法乙酰A羧化Anti-GNG5 Antibody大鼠凋亡相关因子配体（FASL）elisa定量检测试剂盒

性磷Anti-GNG5 Antibody大鼠钙卫蛋白（CALPRO）elisa定量检测试剂盒

α1性糖蛋白1/类粘蛋白1Anti-GNPDA1 Antibody大鼠膜联蛋白A5（ANXA5）elisa定量检测试剂盒

水通道蛋白-5抗原Anti-GNL3L Antibody大鼠凝血抗凝血复合物（TAT）elisa定量检测试剂盒

糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽Anti-GNRH1 Antibody大鼠转化生长因子β3（TGF-β3）elisa定量检测试剂盒

β淀粉样肽25-35/Aβ25-35/Amyloid β (25-35) (多肽)Anti-GORASP2 Antibody大鼠Apelin蛋白（APLN）elisa定量检测试剂盒

β淀粉样肽 1-42 (C端多肽)Anti-GOLT1A Antibody大鼠叉头框蛋白P3（FOXP3）elisa定量检测试剂盒

甲胎蛋白多肽Anti-GORASP2 Antibody大鼠脂肪结合蛋白1（FABP1）elisa定量检测试剂盒