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鱼促肾上腺皮质激素试剂盒操作步骤

时间:2020-2-28阅读:141
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鱼促肾上腺皮质激素试剂盒操作步骤

1.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

3.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

5.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

6.温育:操作同3。

7.洗涤:操作同5。

8.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

9.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

10.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

鱼促肾上腺皮质激素试剂盒以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 

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