稳定表达的人食管癌细胞；EC109-Cas9-572 返回列表页

细胞名称 稳定表达的人食管癌细胞；EC109-Cas9-572

形态特性 上皮样

生长特性 贴壁生长

特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使EC109细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。

培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418

传代方法 1:3传代；2~3天1次。

传代情况 C3

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS

支原体检测 培养法（-）

STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,10；D12S391：19,20；D13S317：11,11；D16S539：12,12；D18S51：12,16；D19S433：13,13；D21S11：30,30；D2S1338：17,20；D3S1358：17,17；D5S818：12,12；D6S1043：13,13；D7S820：8,12；D8S1179：13,14；；FGA：25,25；Penta E：16,16；TH01：9,9；TPOX：8,8；vWA：16,17；

同工酶

染色体

产品图片：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

匹克氏肉汤基础 规格:  100g 作用：  用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格:  250g 作用：  用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格:  250g 作用：  用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格:  250g 作用：  用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格:  250g 作用：  加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格:  250g 作用：  可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格:  2x5支 作用：  试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格:  10支 作用：  每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格:  10支 作用：  每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF

20mg/支 咖啡酸 Caffeic acid 3,4-二羟基肉桂酸 331-39-5

20mg/支 盐酸氨基葡萄糖 D-Glucosamine hydrochloride D-盐酸氨基葡萄糖 66-84-2

20mg/支 罗通定 Rotundine 左旋四氢巴马汀;左旋延胡索乙素 10097-84-4

20mg/支 落新妇苷 Astilbin 29838-67-3

20mg/支 雷公藤甲素 Triptolide 雷公藤内酯醇;雷公藤多甙 38748-32-2

20mg/支 雷公藤乙素 Tripdiolide 雷公藤乙素;雷公藤羟内酯;雷公藤内酯二醇 38647-10-8

20mg/支 雷公藤内酯甲 Wilforlide A 雷公藤酯甲 84104-71-2

20mg/支 木犀草素 Luteolin 藤黄菌素 491-70-3

20mg/支 木犀草苷 Cynaroside 木犀草素-7-O-葡萄糖苷;青兰苷 1268798

20mg/支 没食子酸 Gallic acid 3,4,5-三羟基苯甲酸 149-91-7

20mg/支 蒙花苷 Buddleoside 480-36-4

20mg/支 莽草酸 Shikimic acid 138-59-0

20mg/支 芹菜素 Apigenin 芹黄素;5,7,4'-三羟基黄酮 520-36-5

20mg/支 青藤碱 Sinomenine 115-53-7

20mg/支 齐墩果酸 Oleanolic acid 土当归酸 508-02-1

20mg/支 七叶皂苷钠 Sodium Aescinate 20977-05-3

20mg/支 木糖醇 Xylitol 戊五醇;五羟基戊烷;1,2,3,4,5-五羟基戊烷 87-99-0

20mg/支 盐酸育亨宾 Yohimbine Hydrochloride 65-19-0

20mg/支 烟碱 L-Nicotine 尼古丁 20033

20mg/支 金雀花碱 Cytisine 野靛碱 485-35-8

20mg/支 秋水仙碱 Colchicine 秋水仙素 64-86-8

20mg/支 薯蓣皂苷元 Diosgenin 薯蓣皂素;地奥配质 512-04-9

20mg/支 薯蓣皂苷 Dioscin 薯蓣皂甙; 重楼皂苷I

脂联素抗体 Anti-Adiponectin

 脂联素受体-1抗体 Anti-Adipo R1 (adiponectin receptor 1)

 脂联素受体-2抗体 Anti-Adipo R2 (adiponectin receptor 2)

 肿瘤转移抑制蛋白1抗体 Anti-CD82/KAI1

 重组膜粘连蛋白-5(人)抗体 Anti-Annexin V (Recomb Humen Annexin V)

 周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗体 Anti-Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C)

 周期素依赖激酶1抗体 Anti-Cdc2/P34CDC2/CDK1(Cell division control protein 2)

 周期素依赖性激酶1抗体 Anti-CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1)

稳定表达的人食管癌细胞；EC109-Cas9-572 周期素依赖性激酶2抗体 Anti-CDK2 (Cyclin-Dependent Kinase 2)

 周期素依赖性激酶3抗体 Anti-CDK3 (cyclin-dependent kinase 3)

 周期素依赖性激酶4抗体 Anti-CDK4 (cyclin-dependent kinase 4)

 周期素依赖性激酶5抗体 Anti-CDK5(Cy

操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。