对于间接ELISA标本一般都要进行稀释，如果加样不准就会造成误差，尤其当稀释倍数大时，很小的误差，会导致较大的相对误差，ELISA试剂盒使阴性（或弱阳性）标本呈阳性（或阴性）。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。目前，大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免以上误差。
在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关，ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
每种试剂都有其*反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。温育一般用湿盒或水浴，ELISA试剂盒反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。
作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正；其次酶标仪波长设置要正确，使用双波长，一个检测波长，一个参比波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外，在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读说明书
综上所述，尽管目前上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘），但是酶联免疫吸附技术目前在技术上尚未做到标准化。受方法学及技术条件的限制，在酶联免疫吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，ELISA试剂盒我们可以通过以上措施把非特异性显色降至zui低限底，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。
酶联免疫吸附试验（ELISA）自问世以来，以其敏感性高，特异性强，操作简便、安全，开创了免疫学诊断的新纪元在临床诊断方面得到了广泛的应用。但是ELISA试剂盒在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性显色问题，ELISA试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物，操作不当等因素都会导致这样的结果。本文就在实验过程中产生的一些原因及如何采取一些措施，消除非特异性显色作以分析。
风湿因子（RF）、黄疸等，类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体，多数为IgM类，能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应，从而呈现非特异性显色。
黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶，如用辣根过氧化物酶为标记物，就有可能产生非特异性显色。
常因样品采集、贮存、处理不当造成如样品溶血，被细菌污染，标本凝集不全等。溶血标本，红细胞溶解破裂，释放出血红素形成，而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。ELISA试剂盒如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP（辣根过氧化酶），有国内报道酶免HBsAg试剂检测溶血标本时可造成假阳性。如在冰箱中保存过久，其中的IgG可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。因此，血标本在采集处理时应小心，在冰箱中保存不易过久。
标本凝集不全时，血清中会残留部分纤维蛋白原，也易造成假阳性。
