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小鼠白介素-6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

阅读:41          发布时间:2019/11/5

小鼠白介素-6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-6(IL-6)水平。用纯化的小鼠白细胞介素-6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-6(IL-6),再与HRP标记的白细胞介素-6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-6(IL-6)浓度。

小鼠白介素-6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

120pg/ml5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液

60pg/ml4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液

30pg/ml3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液

15pg/ml2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液

7.5pg/ml1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

小鼠白介素-6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月

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