本周焦点 ELISA试验操作失利的主要原因

我们知道，ELISA测定中影响要素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检验中除正常反响外，有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性)，那么致使试验不成功的主要原因有哪些咧？

   
，标本的影响：溶血标本及混有红细胞的血清选用ELISA法检测易发生假阳性。或许是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)，在洗刷过程中往往难以*洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺可溶性的有色物质，即显蓝色，发生假阳性。所以严重溶血标本禁用。
   
第二，标本受细菌污染：因菌体中或许含有内源性辣根过氧化物酶，因而，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可发生非特异性显色而搅扰测定结果。
   
第三，标本保存不妥：在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、构成假阳性；为克服上述搅扰，ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜收集；如不能当即测定，5d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不行激烈振动。
   
第四，标本凝结不全：在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够构成肉眼可见的纤维蛋白块，易构成假阳性结果；因而血液标本收集后有必要使其充分凝结后再别离血清。