【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
1.产品名称：兔肺大动脉平滑肌细胞操作步骤
2.组织来源：肺动脉组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
兔肺大动脉平滑肌细胞分离自肺大动脉组织；肺大动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺大动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上、下叶。右肺动脉较长而粗，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶。肺大动脉平滑肌细胞是肺血管的重要结构细胞之一，在调控肺血管的收缩和舒张功能中有重要作用。肺大动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。肺大动脉平滑肌细胞的异常是肺动脉高压发生发展的重要病理学特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的关键。研究表明，急性和慢性缺氧均可导致肺动脉高压，即缺氧性肺动脉高压，推断缺氧可能是通过促进肺大动脉平滑肌细胞的增殖而参与缺氧性肺动脉高压的发生发展。肺大动脉平滑肌细胞主要功能：①细胞表面表达介质（ICAM-1和VCAM-1）参与血管壁炎症反应；②是多数重要动脉疾病的靶细胞。肺大动脉平滑肌细胞与主要病生理变化：①平滑肌增生易致肺动脉高压；②先天性肺动脉狭窄；③肺动脉栓塞。
本公司的兔肺大动脉平滑肌细胞采用*-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
DMEM[H]、FBS、平滑肌细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
Cy5标记的兔抗牛IgM GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2)
Cy5.5标记的兔抗牛IgM GRO Alpha/GRO/MGSA/CXCL1 protein (growthregulated oncogene Alpha)
Cy7标记的兔抗牛IgM GRP78(glucose regulated protein 78)
*标记的兔抗牛IgM GSR/GRase(glutathione reductase)
胶体金标记的兔抗牛IgM A/H1N1-M2 Human(Avian influenza Matrix Protein-2 Human)
Alexa Fluor 488标记的兔抗牛IgM A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine)
Alexa Fluor 555标记的兔抗牛IgM H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗牛IgM H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
罗丹明标记的兔抗鸡IgG H2AX peptide
胶体金标记的兔抗鸡IgG H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
Alexa Fluor 555标记的兔抗鸡IgG H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗鸡IgG Haase(hyaluronidase)
*标记的兔抗鸡IgG HA tag
Cy3标记的兔抗鸡IgG HA tag(map)
Cy5标记的兔抗鸡IgG HAI-1(Hepatocyte Growth Factor Activator Inhibitor 1)
Cy5.5标记的兔抗鸡IgG HBA1(hemoglobin alpha 1)
Cy7标记的兔抗鸡IgG VWCE/URG11(von Willebrand factor C and EGF domain-containing)
PE标记的兔抗鸡IgG URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)
PE-Cy3标记的兔抗鸡IgG URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal
PE-CY5标记的兔抗鸡IgG Alpha-HCG(Human chorionic gonadotropin Alpha )
APC标记的兔抗鸡IgG HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human
advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人肾小球组织糖基化终末产物 48T
UP(Human Proteinuria) ELISA Kit 人尿蛋白 48T
LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9 48T
Alpha2-MG(Human Alpha2 macroglobulin) ELISA Kit 人α2巨球蛋白 48T
Kim-1(Human Kidney injury molecule 1) ELISA Kit 人肾损伤分子1 48T
AQP-5(Human Aquaporin 5) ELISA Kit 人水通道蛋白5 48T
AQP-4(Human Aquaporin 4) ELISA Kit 人水通道蛋白4 48T
AQP-3(Human Aquaporin 3) ELISA Kit 人水通道蛋白3 48T
AQP-2(Human Aquaporin 2) ELISA Kit 人水通道蛋白2 48T
AQP-1(Human Aquaporin 1) ELISA Kit 人水通道蛋白1 48T
AQP-0(Human Aquaporin 0) ELISA Kit 人水通道蛋白0 48T
RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit 人类风湿因子 48T
ASO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit 人抗链球菌溶血素O/抗O 48T
ACA(Human adrenal cortex antibody) ELISA Kit 人肾上腺皮质抗体 48T
GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小球基底膜抗体 48T
BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白 48T
ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜联蛋白Ⅴ 48T
TBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小管基底膜抗体 48T
AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13 48T
