【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
1.产品名称：兔角膜内皮细胞操作步骤
2.组织来源：眼角膜组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
兔角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，*部zui薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞(CEC)在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵”功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至*失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是*的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na+梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。
本公司的兔角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经NSE免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
M199、FBS、内皮细胞生长添加剂、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
myelin protein 2)
PE-Cy3标记的兔抗人IgM MYSM1(Myb-like, SWIRM and MPN domain-containing protein 1)
PE-CY5标记的兔抗人IgM MYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse
APC标记的兔抗人IgM CHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7)
Alexa Fluor 350标记的兔抗人IgM Nanog fragment
Alexa Fluor 488标记的兔抗人IgM Natrexone/BSA:Natrexone/KLH
Alexa Fluor 555标记的兔抗人IgM NAP1 (nucleosome assembly protein 1)
Alexa Fluor 647标记的兔抗人IgM N-cadherin
FITC标记的兔抗人分泌型IgA E-cadherin
罗丹明标记的兔抗人分泌型IgA Nephrin Protein
Alexa Fluor 647标记的兔抗人分泌型IgA Neurocan
APC标记的兔抗人分泌型IgA NF2/merlin(neurofibromatosis type 2)
Alexa Fluor 350标记的兔抗人分泌型IgA NFATc1
Alexa Fluor 488标记的兔抗人分泌型IgA phospho-NFKB p65 (pSer536) peptide
Cy5标记的兔抗人分泌型IgA NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB)
Cy5.5标记的兔抗人分泌型IgA NGN3(neurogenin 3; Neurog3)
Cy7标记的兔抗人分泌型IgA NGX6 (nasopharyngeal carcinoma/NPC associated gene 6)
PE标记的兔抗人分泌型IgA NIT2 (nitrilase family, member 2)
胶体金标记的兔抗人分泌型IgA NKA(Neurokinin A)
APC标记的兔抗小鼠IgG-Fc NKG2A/CD159a/KLRC1
Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠IgG-Fc NKG2D(natural killer cell group 2D)
Alexa Fluor 488标记的兔抗小鼠IgG-Fc Nm23(NDP Kinase A,NDPKA)
PR3-ANCA(Human proteinase-antineutrophil cytoplasmic antibody) ELISA Kit 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体 48T
Beta-LPH(Human Beta-lipotropic hormone) ELISA Kit 人β-促脂素 48T
LTA(Human lipoteichoic acids) ELISA Kit 人脂磷壁酸 48T
AD(Human amiodarone) ELISA Kit 人乙胺碘呋酮 48T
SA(Human Sialic acid) ELISA Kit 人唾液酸 48T
SM(Human sphingomyelin) ELISA Kit 人鞘磷脂 48T
UFC(Human urinary free cortisol) ELISA Kit 人尿游离* 48T
ASCA(Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody) ELISA Kit 人抗酿酒酵母抗体 48T
VLA4(Human very late appearing antigen 4) ELISA Kit 人迟现抗原4 48T
AO(Human Acrine Orange) ELISA Kit 人吖啶橙 48T
MTX(Human methotrexate) ELISA Kit 人甲胺喋呤 48T
PABA(Human para-aminobenzoic acid) ELISA Kit 人对氨基苯甲酸 48T
LPA(Human L-phenylalanine) ELISA Kit 人苯* 48T
Irna(Human Immune RNA) ELISA Kit 人免疫核糖核酸 48T
Beta-Nph(Human Beta-naphthol) ELISA Kit 人β萘酚 48T
BLI(Human Beta-Lactamase inhibitors) ELISA Kit 人β内酰胺酶抑制剂 48T
Gal(Human Alpha-galactoyl) ELISA Kit 人α半乳糖基抗体 48T
AlphaNAG (Human AlphaN-acetylglucosaminidase) ELISA Kit 人αN已酰氨基葡糖苷酶 48T
Alpha2-PI (Human Alpha2-plasmin inhititor) ELISA Kit 人α2纤溶酶抑制物 48T
